壽胎丸生殖及遺傳安全性實驗研究.pdf

1、目的：觀察壽胎丸對嚙齒類與非嚙齒類動物潛在的致畸胎作用及其發(fā)育毒性表現(xiàn)，揭示其是否存在胚胎毒性和致畸性。并通過體內(nèi)染毒觀察其對KM 小鼠骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率及體外染毒觀察其對鼠傷寒沙門氏TA系菌株基因回復(fù)突變菌落、CHL 細(xì)胞染色體斷裂情況，進(jìn)一步檢測其是否致遺傳毒性。從而為婦女妊娠期臨床合理安全應(yīng)用提供實驗學(xué)依據(jù)，以確保妊娠期婦女絕對用藥安全。
　　 方法：采用解剖顯微及病理切片等技術(shù)與方法，觀察壽胎丸不同劑量對嚙齒類與非嚙類動

2、物親代生殖狀態(tài)及F1代胚胎-胎仔發(fā)育狀態(tài)的影響，分別與溶劑對照比較。檢測妊娠期孕鼠（孕兔）增重、攝食量、交配率、受孕率等，觀察胎仔活胎率、吸收胎率、畸胎率及胎仔內(nèi)臟、骨骼等異常狀況，從而獲得其可能的胚胎毒性和發(fā)育毒性。采用CHL細(xì)胞培養(yǎng)、直接平板摻入等技術(shù)與方法，通過體外染毒試驗檢測其對TA系菌株回復(fù)突變致DNA堿基置換及移碼突變性及對CHL細(xì)胞染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)變化等影響，并通過體內(nèi)染毒試驗觀察其致KM小鼠骨髓細(xì)胞染色體完整性受損及染色

3、體分離異常等狀況，從而進(jìn)一步確定其是否致遺傳毒性作用。
　　 結(jié)果：本研究以中醫(yī)藥自身特點(diǎn)為基礎(chǔ)，采用改良的生殖及遺傳毒性試驗方法與技術(shù)，其結(jié)果如下：
　　 ①采用健康育齡Sprague-Dawley 孕鼠為模型系統(tǒng)，探討壽胎丸對嚙齒類動物潛在的生殖發(fā)育毒性及胚胎毒性，設(shè)50g/kg、10g/kg、2g/kg三個不同劑量組，并設(shè)溶劑對照組和陽性對照組。結(jié)果表明其不同劑量對胎鼠的活胎率、吸收胎率和畸胎率，窩均體重、身長、尾

4、長，以及胎盤均重和骨骼發(fā)育與溶劑對照比較均未見明顯差異。陽性對照組胎鼠的畸胎率和吸收胎率卻明顯高于溶劑對照組，胎鼠的窩均體重、身長、尾長，以及胎盤均重則明顯低于溶劑對照組。
　　 ②采用健康育齡Chinese-White 孕兔為模型系統(tǒng)，探討其對非嚙齒類動物潛在的生殖發(fā)育毒性及胚胎毒性，設(shè)40g/kg、10g/kg、2.5g/kg三個劑量組和溶劑對照組。結(jié)果表明其對孕兔未表現(xiàn)出明顯的生殖毒性作用，對胎兔的活胎率、死胎率、吸收胎率

5、和總畸胎率與溶劑對照比較未見明顯差異，且對胎兔的生長和骨骼發(fā)育也未見明顯影響。
　　 ③采用平板摻入法檢測壽胎丸致遺傳毒性，分別設(shè)0.8、3.1、12.5、50.0 和200.0mg/皿不同濃度，進(jìn)行測試其對TA97、TA98、TA100 和TA102菌株的致突變性，結(jié)果在0.8-200.0mg/皿濃度范圍內(nèi)，無論有無S9活化系統(tǒng)，其作用下的四種測試菌株的回變菌落與溶劑對照相比均無明顯增加，且回變菌落背景正常。
　　 ④

6、采用100g/kg 劑量對KM 小鼠進(jìn)行體內(nèi)染毒，依據(jù)時效關(guān)系，以24h、48h 不同時間點(diǎn)取樣，結(jié)果其骨髓細(xì)胞微核率與溶劑對照相比無明顯增加。而陽性對照組微核率較溶劑對照組明顯增加，具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義（ P<0.05）。依據(jù)量效關(guān)系，本研究又設(shè)25g/kg、50g/kg、100g/kg不同劑量，再對KM 小鼠進(jìn)行染毒，24h 后采樣，其骨髓嗜多染紅細(xì)胞的微核率分別與溶劑對照相比均無明顯增加（ P>0.05）。觀察各劑量組與溶劑對照組

7、小鼠骨髓細(xì)胞嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值（PCE/NCE），該比值未見明顯降低。
　　 ⑤采用CHL細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，設(shè)5000、2500、1250μg/ml不同劑量對CHL細(xì)胞體外染毒，結(jié)果無論24h及48h收集細(xì)胞，進(jìn)行CHL細(xì)胞染色體畸變分析，各劑量組、溶劑對照組染色體畸變率均在正常范圍。又在+S9與-S9兩種測試條件下，結(jié)果在5000μg/ml濃度范圍內(nèi)，染色體畸變也在正常范圍。
　　 結(jié)論：綜合以上實驗結(jié)果，胚胎

8、-胎仔發(fā)育毒性試驗在本研究所確定的條件下，壽胎丸藥液對健康育齡Sprague-Dawley孕鼠的胚胎毒性及發(fā)育毒性最大無損害效應(yīng)水平為50g/kg。其對健康育齡Chinese-White孕兔的胚胎毒性及發(fā)育毒性最大無損害效應(yīng)水平為40g/kg。遺傳毒性試驗在本研究所確定的條件下，無論有無S9活化系統(tǒng)，各劑量作用下的TA系4 種測試菌株的基因回變菌落數(shù)與溶劑對照相比均無明顯增加，初步認(rèn)定其在200.0mg/皿濃度范圍內(nèi)，對TA97、TA9

9、8、TA100、TA102 菌株無致基因突變作用。又設(shè)不同劑量對KM小鼠體內(nèi)染毒，與溶劑對照相比微核率均無明顯增加，初步認(rèn)定其在100g/kg劑量范圍內(nèi)，無明顯致小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞染色體完整性受損及染色體分離異常作用。最后設(shè)5000μg/ml、2500μg/ml、1250μg/ml不同劑量，對CHL細(xì)胞進(jìn)行體外染毒，在+S9與-S9兩種測試條件下，染色體畸變率均在正常范圍，進(jìn)一步認(rèn)定其5000μg/ml 濃度的劑量范圍內(nèi)，未見有明顯致