靶向整合素β1(ITGB-1)的RNAi對胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的:檢測胰腺癌組織中整合素β1(ITGB1)的表達，并分析其臨床意義。轉(zhuǎn)染靶向ITGB1基因的小干擾RNA片段，并研究其對胰腺癌低分化細胞株P(guān)ANC-1的ITGB1表達的抑制作用及對該細胞侵襲能力、增殖活性、凋亡率、藥物敏感性等特性的影響。為進一步研究胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移、耐藥及治療等在一定程度上奠定基礎(chǔ)。 方法:①免疫組織化學(xué)方法檢測28例胰腺癌組織及14例正常胰腺組織標(biāo)本中ITGB1蛋白的表達，比較其差異，分析ITGB1的表達

2、量與胰腺癌分化程度、組織類型、淋巴轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系。②設(shè)計制備多對針對ITGB1基因的小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)，通過陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染胰腺癌低分化細胞株P(guān)ANC-1，流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染效率，采用實時定量PCR(RQ-PCR)法測定轉(zhuǎn)染后PANC-1細胞ITGB1及內(nèi)參ab1的mRNA表達、測算干擾效率、檢測干擾效果維持時間、篩選出最有效siRNA，WesternBl

3、ot法測定轉(zhuǎn)染后PANC-1細胞ITGB1蛋白的表達。③對于轉(zhuǎn)染后PANC-1細胞，用Transwell小室試驗檢測其侵襲能力、MTT法檢測其增殖活性、AnnexinV/PI雙染法檢測其在有與無5-Fu作用下的早期凋亡率、MTT法檢測在梯度濃度的5-Fu作用下的細胞存活率。 結(jié)果:①胰腺癌組織中整合素β1表達明顯較正常胰腺組織高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌組織整合素β1表達顯著升高，分期較高的胰腺癌組織整合素β1表達亦顯著升高。②細胞

4、數(shù)約為每孔2.0×105個、siRNA濃度約為50nmol/L時，有較佳的轉(zhuǎn)染效率，繼續(xù)提高siRNA濃度并不能明顯提高轉(zhuǎn)染效率；s1RNA3導(dǎo)致的ITGB1mRNA表達降低最為顯著，干擾效率最高；轉(zhuǎn)染效果能夠至少維持至轉(zhuǎn)染后的96h；轉(zhuǎn)染了siRNA3后48h的PANC-1細胞ITGB1蛋白的表達量有所減少。③轉(zhuǎn)染了siRNA3的PANC-1細胞，在體外的侵襲能力明顯減弱，增殖活性及細胞凋亡率無明顯影響；但在5-Fu作用下，其細胞凋亡