14-3-3σ增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1細(xì)胞增殖和侵襲能力.pdf

1、目的：采用RT-qPCR和western blot檢測不同分化程度胰腺癌細(xì)胞株中14-3-3σ的表達(dá)，分析14-3-3σ與不同分化程度胰腺癌細(xì)胞株的表達(dá)相關(guān)性。探討14-3-3σ對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的細(xì)胞增殖和侵襲等生物學(xué)效應(yīng)。
　　方法：提取胰腺癌細(xì)胞株BxPC3、CAPAN-1、PANC-1、AsPC-1、SW1990、MiaPaCa-2、CFPAC-1的總RNA和總蛋白，將總RNA和總蛋白定量后采用RT-qPCR和we

2、sternblot在mRNA水平和蛋白水平檢測七株胰腺癌細(xì)胞株中14-3-3σ的表達(dá)情況。構(gòu)建針對(duì)人源性14-3-3σ全長編碼區(qū)cDNA的真核表達(dá)載體pEGFP-14-3-3σ，用脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染入胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1中。以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組與轉(zhuǎn)染空載體pEGFP-N1組胰腺癌細(xì)胞株 PANC-1作對(duì)照。利用 RT-qPCR和Western blot分別檢測胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1中14-3-3σmRNA及蛋白表達(dá)水平；應(yīng)用MTS法和tr

3、answell法檢測細(xì)胞增殖和侵襲能力。
　　結(jié)果：利用RT-qPCR法和westernblot法成功檢測了七種不同分化程度的胰腺癌細(xì)胞株中14-3-3σ的表達(dá)水平，14-3-3σmRNA的表達(dá)水平和14-3-3σ蛋白水平均在BxPC3,SW1990和AsPC-1呈高度表達(dá)，在MiaPaCa-2和PANC-1中呈現(xiàn)低度表達(dá)，在CFPAC-1和CAPAN-1中表達(dá)量介于上述兩者之間。構(gòu)建pEGFP-14-3-3σ，將其轉(zhuǎn)染 PANC

4、-1細(xì)胞48小時(shí)后14-3-3σmRNA及蛋白表達(dá)水平顯著高于轉(zhuǎn)染空載體pEGFP-N1組和空白對(duì)照組（p值＜0.05）。MTS法觀察到實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組呈現(xiàn)增快現(xiàn)象（p值＜0.05），transwell法檢測到實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞侵襲能力較對(duì)照組增強(qiáng)（p值＜0.05）。
　　結(jié)論：14-3-3σ與不同分化程度胰腺癌細(xì)胞株的表達(dá)相關(guān)性有助于解析其在胰腺癌細(xì)胞生長、侵襲轉(zhuǎn)移中的分子機(jī)制。利用 pEGFP-14-3-3σ轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞