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文檔簡介
1、目的:探討與骨髓基質(zhì)HS-5細胞直接接觸對HEL白血病細胞耐藥性的誘發(fā)作用及其機制。
方法:采用人急性紅白血病HEL細胞株與骨髓基質(zhì)HS-5細胞共培養(yǎng)模式模擬體內(nèi)白血病細胞及其周圍的造血微環(huán)境,應(yīng)用CCK-8法檢測HEL細胞對Ara-c,DNR,VP16,MTX化療藥物的敏感性,流式細胞術(shù)檢測HEL細胞周期時相分布,Real-time RT-PCR方法檢測p19、p21、p27、MDR1、ABCG2、bcl-2基因的mRNA表
2、達,Western Blot方法檢測t-Akt、p-Akt Ser473、p-GSK3βSer9、p-STAT3 Tyr705、Bcl-2、cleaved-Notch1V1754及Hes1蛋白表達。
結(jié)果:與HS-5細胞共培養(yǎng)后的HEL細胞對四種化療藥物的敏感性均顯著降低。在共培養(yǎng)24h時,HEL細胞阻滯于G0/G1期,G0/G1期的細胞比例明顯增多。PCR結(jié)果顯示p21基因的轉(zhuǎn)錄水平隨著共培養(yǎng)時間的延長逐漸上調(diào);p19基因的
3、mRNA水平在12h時明顯下調(diào),隨后又恢復(fù);其它基因的改變均無統(tǒng)計學(xué)意義。Western Blot結(jié)果表明共培養(yǎng)后HEL細胞的p-Akt Ser473、p-GSK3βSer9、cleaved-Notch1V1754蛋白及Bcl-2蛋白表達上調(diào),Hes1蛋白表達下調(diào),p-STAT3 Tyr705表達無明顯變化。
結(jié)論:與骨髓基質(zhì)HS-5細胞的直接接觸可增強HEL細胞對化療藥物的抵抗作用。本研究結(jié)果將有助于揭示骨髓微環(huán)境對白血病細
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