子宮內膜異位癥患者卵泡液對小鼠卵子發(fā)育與受精的影響及卵泡液中ENA-78的變化.pdf

1、背景:子宮內膜異位癥是一種具有惡性腫瘤行為的良性疾病，可以引起盆腔疼痛、月經異常及不孕等癥狀。育齡期婦女中患病率約為25％，其中30％～50％合并不孕。一直以來，子宮內膜異位癥及其不孕的治療效果均不十分理想，這與其發(fā)病機制及不孕機制不甚明確有關。近三十年來，科研工作者及臨床醫(yī)生對子宮內膜異位癥做了大量的研究，尚未能完全闡明其相關機制。輔助生殖技術的廣泛開展，不但為子宮內膜異位癥合并不孕患者提供了良好的治療方法，同時也為從不同角度及環(huán)節(jié)研

2、究子宮內膜異位癥導致不孕的機制提供了可能。多數學者認為子宮內膜異位癥合并不孕患者與輸卵管因素不孕患者相比，其體外受精-胚胎移植的成功率較低，這與子宮內膜異位癥對精卵受精能力、胚胎質量及種植環(huán)境的影響均有一定關系。為使體外受精－胚胎移植成功率進一步提高，從各個層面探討子宮內膜異位癥造成不孕的機制尤為重要。 目的:觀察子宮內膜異位癥患者卵泡液對小鼠成熟卵子體外受精及未成熟卵子體外成熟與受精的影響，探討子宮內膜異位癥造成不孕的機制；檢

3、測子宮內膜異位癥患者卵泡液ENA－78水平，了解子宮內膜異位癥患者卵泡液微環(huán)境變化。 方法: 一、子宮內膜異位癥患者卵泡液對小鼠成熟卵母細胞體外受精的影響 1、昆明白雌性小鼠經HMG促排卵，44～48小時后注射HCG，15～17小時脫頸法處死小鼠，取出輸卵管，解剖顯微鏡下收集輸卵管內成熟卵母細胞。將收集到的卵母細胞隨機分為三組進行體外受精：空白對照組：DMEM液+10％胎牛血清+50IU/ml青霉素+50μg/m

4、l鏈霉素；研究組：DMEM液+10％胎牛血清+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素+40％子宮內膜異位癥患者卵泡液；對照組：DMEM液+10％胎牛血清+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素+40％輸卵管因素不孕患者卵泡液。 2、統(tǒng)計三組卵母細胞受精率。 二、子宮內膜異位癥患者卵泡液對小鼠未成熟卵子體外成熟及受精的影響 1、昆明白雌性小鼠經HMG促排卵，44～48小時后脫頸法處死小鼠，取出卵巢，解剖顯微

5、鏡下收集未成熟的卵母細胞。將收集到的卵母細胞隨機分為三組進行體外成熟培養(yǎng)：空白對照組：DMEM液+10％胎牛血清+1IU/mlFSH+0．5IU/mlLH+0．5IU/mlHCG+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素；研究組：DMEM液+10％胎牛血清+1IU/mlFSH+0．5IU/mlLH+0．5IU/mlHCG+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素+40％子宮內膜異位癥患者卵泡液；對照組：DMEM液+10％胎牛血清+1

6、IU/mlFSH+0．5IU/mlLH+0．5IU/mlHCG+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素+40％輸卵管因素患者卵泡液。取卵當天及培養(yǎng)后24h、36h、48h、54h在倒置顯微鏡下觀察三組卵母細胞的分期及成熟情況。排出第一極體（PBI）的卵母細胞判為MⅡ期（核成熟）。 2、對三組體外成熟的MⅡ期卵母細胞進行體外受精。精子來源為昆明白雄性小鼠，體外受精液：DMEM液+10％胎牛血清+50IU/ML青霉素+50μg/

7、ml鏈霉素。 3、統(tǒng)計三組卵母細胞體外成熟率及體外受精率。 三、子宮內膜異位癥患者卵泡液中上皮中性粒細胞活化肽-78（ENA-78）水平的變化 1、腹腔鏡、開腹手術或卵巢囊腫穿刺證實為子宮內膜異位癥患者及腹腔鏡或開腹手術確診為輸卵管性不孕患者，采用黃體期降調節(jié)長方案進行促排卵，取卵時收集第一管無血液污染卵泡液，卵泡液經1000×g離心10分鐘，取上清液，-20℃保存。 2、ELSIA試劑盒對收集的卵泡液進

8、行檢測。 結果: 一、子宮內膜異位癥患者卵泡液對小鼠成熟卵母細胞體外受精的影響 體內成熟小鼠卵母細胞在三種不同成份體外受精液中進行體外受精，研究組、對照組及空白對照組體外受精率分別為68．28％，74％，78．5％。三組體外受精情況比較，無顯著性差異。 二、子宮內膜異位癥患者卵泡液對小鼠未成熟卵母細胞體外成熟及受精的影響 1、不同期別卵母細胞體外成熟情況： GV期小鼠卵母細胞研究組、對照

9、組及空白對照組體外成熟率分別為25．81％，34．18％，38．38％，研究組成熟率明顯低于對照組及空白對照組，對照組與空白對照組比較無明顯差異；MⅠ期小鼠卵母細胞三組體外成熟率分別為46．33％，58．02％，62．83％，研究組成熟率明顯低于對照組及空白對照組，對照組與空白對照組比較無明顯差異；每組GV期與MⅠ期比較，MⅠ期體外成熟率均高于GV期，有顯著性差異。 2、不同期別體外成熟卵母細胞體外受精情況 來自GV期體

10、外成熟的卵母細胞研究組、對照組及空白對照組體外受精率分別為41．67％，58．33％，58．77％，研究組受精率明顯低于對照組及空白對照組，對照組與空白對照組比較無明顯差異；來自MⅠ期體外成熟的卵母細胞三組體外受精率分別為57．43％，70．73％，73．33％，研究組受精率明顯低于對照組及空白對照組，對照組與空白對照組比較無明顯差異；每組GV期體外成熟的卵母細胞與MⅠ期體外成熟的卵母細胞比較，MⅠ期體外成熟的卵母細胞體外受精率均高于G

11、V期，有顯著性差異。 三、子宮內膜異位癥患者卵泡液中ENA-78水平的變化 研究組患者卵泡液中ENA-78濃度平均為185．55±71．75 pg/ml，對照組患者卵泡液濃度平均為130．79±55．13pg/ml，兩組比較研究組患者卵泡液水平明顯高于對照組，有顯著性差異。 結論: 1．子宮內膜異位癥患者卵泡液對小鼠體內成熟卵母細胞受精能力無明顯影響； 2．子宮內膜異位癥患者卵泡液不僅降低了小鼠未