建立兔椎間盤(pán)器官體外培養(yǎng)系統(tǒng)觀察髓核組織和細(xì)胞的生物學(xué)特性.pdf

1、目的:體外培養(yǎng)兔整體椎間盤(pán)器官包括上下椎體骨質(zhì)、上下軟骨終板、纖維環(huán)及髓核組織，觀察髓核組織和細(xì)胞生物學(xué)特性，探索體外培養(yǎng)椎間盤(pán)器官建立椎間盤(pán)退行性變模型的可行性。
　　 方法:分離兔帶骨質(zhì)軟骨終板的椎間盤(pán)器官，采用等滲透壓培養(yǎng)基培養(yǎng)。觀察組織膨脹程度、在0d(新鮮)、7d、14d用組織切片HE染色觀察組織結(jié)構(gòu)、透射電鏡觀測(cè)髓核細(xì)胞核、CCK-8試劑盒檢測(cè)髓核細(xì)胞活性、TUNEL檢測(cè)髓核細(xì)胞凋亡、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)髓核組織聚集

2、蛋白聚糖及Ⅱ型膠原mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:1、培養(yǎng)72h后，組織膨脹趨于穩(wěn)定，組織重量增加約為18.0％，培養(yǎng)1-4h間，組織膨脹速度最快，隨后68小時(shí)，緩慢連續(xù)增加;2、培養(yǎng)14d后，椎間盤(pán)大體結(jié)構(gòu)仍得以維持，椎間盤(pán)解剖結(jié)構(gòu)清楚。14d時(shí)，髓核細(xì)胞外基質(zhì)降解較7d明顯，髓核數(shù)量細(xì)胞明顯較7d減少，從0d-14d表現(xiàn)為漸進(jìn)退變過(guò)程;3、CCK-8試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn)7d時(shí)髓核細(xì)胞活性率為54％±9％，14d為22％±5％，7

3、d與14d細(xì)胞活性比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）;4、透射電鏡發(fā)現(xiàn):14d時(shí)，髓核細(xì)胞核較7d時(shí)明顯皺縮，細(xì)胞基質(zhì)降解亦明顯，提示細(xì)胞凋亡;5、TUNEL凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn):14d髓核細(xì)胞凋亡率為44.97％±16.45％較新鮮髓核細(xì)胞5.71％±6.52％增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;6、RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn):蛋白聚糖與Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)均隨培養(yǎng)時(shí)間增加而表達(dá)下降，下降均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:體外