基于高通量測序分析預(yù)測羽扇豆醇與miRNA相關(guān)的抑癌路徑.pdf

1、三萜類化合物作為一種天然產(chǎn)物已被發(fā)現(xiàn)具有眾多的生物學(xué)活性，其中，羽扇豆醇在抗癌方面被證明參與多種信號通路，包括促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞周期、誘導(dǎo)分化、敏化化療抗性、以及抑制腫瘤細(xì)胞生成等。有研究表明羽扇豆醇調(diào)控miRNA，作為抑制腫瘤通路的前導(dǎo)分子，但其調(diào)控途徑尚未明確。本研究以人類宮頸癌細(xì)胞為研究對象，采用高通量定量技術(shù)從三個層面，miRNA水平、轉(zhuǎn)錄組表達(dá)水平和蛋白組水平，根據(jù)HeLa細(xì)胞中miRNA、mRNA、蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變

2、化，以熒光定量PCR結(jié)果為依據(jù)，探索在羽扇豆醇處理?xiàng)l件下，羽扇豆醇抑制HeLa細(xì)胞的分子途徑，為揭示羽扇豆醇抑癌途徑奠定理論與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　通過GFOLD和DESeq計(jì)算分析，本研究發(fā)現(xiàn)在100μM羽扇豆醇處理12h的條件下，HeLa細(xì)胞中有9個顯著上調(diào)的miRNA，分別為hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-193b-3p、 hsa-miR-140-3p、 hsa-miR-940、 hsa-miR-889-3p、hs

3、a-miR-1307-5p、hsa-miR-1293、hsa-miR-3124-5p、hsa-miR-152-5p，和6個顯著下調(diào)的miRNA，包括 hsa-miR-152-3p、hsa-miR-550a-3p、hsa-miR-183-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-182-5p、hsa-miR-99b-3p。以miRNA和相應(yīng)靶標(biāo)mRNA調(diào)控關(guān)系為依據(jù)，根據(jù)Diana-microT-CDS網(wǎng)站搜索和miRanda軟

4、件預(yù)測miRNA靶標(biāo)結(jié)果與差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄組和蛋白組結(jié)合分析，篩選出可以作為研究對象的hsa-miR-183-96-182基因簇和相應(yīng)的預(yù)測靶標(biāo)KIAA1199和PBX1，用熒光定量PCR手段驗(yàn)證并檢測篩選出的生物標(biāo)記性分子在不同時間節(jié)點(diǎn)、不同藥物處理?xiàng)l件下的相對表達(dá)水平，證實(shí)KIAA1199是hsa-miR-183的靶標(biāo)，PBX1是hsa-miR-182的靶標(biāo)，推測hsa-miR-96與hsa-miR-182共同調(diào)控PBX1。