肺腺癌淋巴管生成相關基因的篩選和初步鑒定.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文肺腺癌淋巴管生成相關基因的篩選和初步鑒定姓名：趙偉鵬申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：陳正堂20090501第三軍醫(yī)人學博士學位論文目的利用全基因組芯片篩選技術，采用Hum鋤GenomeU133Plus2OA玎ay差異篩選肺腺癌淋巴管生成相關的基因。通過GenBank數(shù)據(jù)庫生物信息學分析，結合已有文獻報道，確定被選的基因，初步驗證其在腫瘤淋巴管生成中的作用。方法1免疫組織化學法檢測淋巴管內(nèi)皮標記物Podop

2、lanin在34例肺腺癌組織和5例肺良性病變組織中的表達，計算LVD，按LVD評分對肺腺癌淋巴管高、低轉移進行分組，分析LVD與腫瘤分期、分化程度及淋巴結轉移等的關系。2采用全基因組芯片篩選的方法，構建肺腺癌高淋巴管生成和低淋巴管生成差異表達的基因文庫(cDNAlibrary)，采用HumanGenomeU133Plus20A11ray篩選肺腺癌淋巴管生成相關的基因，GenBank數(shù)據(jù)庫生物信息學分析，結合文獻報道選取上調(diào)和下調(diào)基因，采

3、用realtimePCR進一步驗證差異表達情況。3以NSCLC為研究對象，利用免疫組織化學方法檢測NSCLC組織中上調(diào)基因(以IGFBP7為對象)、下調(diào)基因(以CDHl為對象)的表達情況，分析IGFBP7、CDHl表達與患者年齡、性別、腫瘤分期、分化程度及淋巴結轉移的關系。4RTPcR檢測人肺癌細胞株和小鼠肺癌細胞株(1ewislungcancerLLC)的IGFBP7的表達。5構建IGFBP7干擾載體pGenesilsiIGFBP7，

4、通過siRNA干擾IGFBP7表達。6應用不完全弗氏佐劑(M)誘導小鼠腹腔淋巴管瘤形成，消化法分離獲得LEC，以鼠尾膠為粘貼劑原代培養(yǎng)。淋巴管形成實驗判定LEC能否形成管樣結構。7建立LLC與LEC共培養(yǎng)體系，用CCK8細胞活性實驗和TransweU小室細胞遷移實驗，分析敲減IGFBP7前后LLC細胞對LEC生長和遷移的影響。8利用C57BL／6小鼠建立敲減IGFBP7的LLC和未敲減IGFBP7的LLC皮下移植瘤模型，利用免疫熒光和共

5、聚焦顯微鏡觀察腫瘤新生淋巴管情況，分析敲減IGFBP7對移植瘤生長、淋巴管生成、淋巴結轉移和肺轉移的影響。結果1Podopl鋤in陽性淋巴管LvD在5例肺炎性假瘤為lO8“3，在34例肺腺癌瘤內(nèi)為1125o，肺腺癌瘤周為23584，瘤周LVD明顯高于前二者(尸o05)。腫瘤分期N12與N0瘤周的LVD分別是24387、18463，前者明顯高于后者(Po01)；III期與IIIⅣ瘤周的LVD分別是18456、24182，前者明顯低于后者(