乳腺癌干細胞促淋巴管生成及淋巴轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、背景和目的: 乳腺癌發(fā)病率逐年上升，已經(jīng)成為女性最常見的惡性腫瘤。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（lymph node metastasis，LNM）是乳腺癌轉(zhuǎn)移的最主要形式，也是導致患者預后不良的重要因素，腫瘤周圍及腫瘤內(nèi)部淋巴管生成是發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的重要原因。腫瘤干細胞是近年來腫瘤領(lǐng)域研究的熱點，乙醛脫氫酶1A1（aldehyde dehydrogenase1A1，ALDH1A1）以NAD或NADP為輔酶將醛類氧化成相應的羧酸，在干細胞的自我保護中起重要

2、功能，同時與細胞分化密切相關(guān)，可以作為正常干細胞和腫瘤干細胞的一種特異性標志物。本課題將研究乳腺癌組織中腫瘤干細胞表達與淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并探討乳腺癌干細胞通過淋巴管生成促進乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移發(fā)生的可能機制。
　　材料與方法: 應用免疫組織化學的方法檢測乳腺癌組織病理切片中ALDH1A1+乳腺癌干細胞的表達率，分析其表達與患者淋巴轉(zhuǎn)移及預后的關(guān)系；應用微球體培養(yǎng)法從乳腺癌細胞系MDA-MB-231中富集乳腺癌干細胞[1]，使用血管內(nèi)皮生

3、長因子C（VEGF-C）對其進行誘導[2]，并應用DAPT抑制Notch通路阻斷乳腺癌干細胞的生物活性作為對照[3]，應用 PCR檢測兩組細胞在不同處理后淋巴管內(nèi)皮細胞特異性標志物VEGFR-3/PROX/LYVE mRNA的表達情況，應用流式細胞儀檢測兩組細胞在不同處理后淋巴管內(nèi)皮特異性標志物 VEGFR-3的表達情況。
　　結(jié)果: 72例乳腺癌患者中，ALDH1A1陽性表達29例，占40.28％，ALDH1A1陰性表達43例，

4、占59.72%；ALDH1A1陽性表達率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（56.76%），顯著高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（22.86%），P＜0.01；根據(jù)ROC曲線所得截斷值（1.5）將患者分為 ALDH1A1高表達組及低表達組，Kaplan-Meier生存分析表明ALDH1A1高表達組患者總生存期、無病生存期、五年生存率及五年無病生存率顯著低于ALDH1A1低表達組，二組間具有顯著統(tǒng)計學差異，P＜0.01。單因素及多因素統(tǒng)計分析表明，ALDH1A1表達、淋巴

5、轉(zhuǎn)移及腫瘤 TNM分期是與乳腺癌預后相關(guān)的重要獨立因素，ALDH1A1高表達組患者預后顯著差于 ALDH1A1低表達組，P＜0.05。
　　微球體培養(yǎng)法從乳腺癌細胞系 MDA-MB-231中富集的乳腺癌干細胞在VEGF-C誘導后，淋巴管內(nèi)皮特異性標志物VEGFR-3、LYVE及PROX的mRNA表達顯著高于對照組，P＜0.05；而以DAPT抑制腫瘤干細胞信號通路后則淋巴管內(nèi)皮特異性標志物表達量極低，并與對照組差異不明顯，P>0.0