ADRM1在肝細(xì)胞癌中的生物學(xué)作用及其對(duì)NF-κB活性的影響.pdf

1、目的:原發(fā)性肝癌是全球范圍內(nèi)第五大最為常見(jiàn)的惡性腫瘤，并高居全球惡性腫瘤死因第二位。目前全球原發(fā)性肝癌病人中最為常見(jiàn)的病理類型是肝細(xì)胞癌，所占比例大約為70％到85％。盡管肝細(xì)胞癌已被深入研究多年，其病因及分子生物學(xué)機(jī)制尚未完全闡明。與此同時(shí)，目前針對(duì)肝細(xì)胞癌的治療手段仍十分有限，肝癌患者的預(yù)后仍不容樂(lè)觀。因此，研究探索與HCC發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的分子生物學(xué)機(jī)制對(duì)于提高HCC診斷及治療水平具有十分重大的意義。
　　 ADRM1(a

2、dhesion-regulating molecule1)是真核細(xì)胞26S蛋白酶體重要的泛素受體之一，并且能與蛋白酶體19S調(diào)節(jié)亞基通過(guò)帽狀結(jié)構(gòu)相連結(jié)從而將去泛素化酶UCH37募集至26S蛋白酶體。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明ADRM1在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)狀態(tài)，并且可能扮演了類似癌基因的角色。盡管如此，ADRM1肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用尚不明了。在本課題中，我們研究了ADRM1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)情況、ADRM1在肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行

3、為中的功能作用及其可能的下游分子機(jī)制，以期為肝細(xì)胞癌的診斷、治療提供新的潛在分子靶點(diǎn)。
　　 方法:采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肝細(xì)胞癌組織和癌旁肝組織ADRM1 mRNA和蛋白表達(dá)情況，采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)三種不同轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞(Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H) ADRM1 mRNA和蛋白表達(dá)水平;利用短發(fā)夾干擾RNA技術(shù)沉默MHCC97-H細(xì)胞ADRM1表達(dá)水平，

4、并采用MTT、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell小室實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)基因沉默ADRM1表達(dá)對(duì)MHCC97-H細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期、體外侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響;采用Western blot檢測(cè)上述三種肝癌細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65和IκB-α表達(dá)水平，以期揭示ADRM1表達(dá)與肝癌細(xì)胞NF-κB水平的潛在聯(lián)系。利用RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)基因沉默ADRM1表達(dá)后MHCC97-H細(xì)胞IκB-α的mRNA和蛋白表達(dá)及核內(nèi)NF-κB

5、 p65蛋白表達(dá)的變化，并采用凝膠遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測(cè)ADRM1基因沉默對(duì)MHCC97-H細(xì)胞NF-κB活性水平的影響。
　　 結(jié)果:ADRM1 mRNA和蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平顯著高于其在癌旁肝組織中的表達(dá)水平。此外，ADRM1在肝癌組織中的蛋白表達(dá)水平與肝癌靜脈侵犯密切相關(guān)。ADRM1在Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H細(xì)胞中的mRNA和蛋白表達(dá)水平逐次升高，與肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力相關(guān);我們成功構(gòu)建特

6、異性針對(duì)ADRM1的短發(fā)夾干擾RNA表達(dá)載體并將其轉(zhuǎn)染至MHCC97-H細(xì)胞。后續(xù)的功能實(shí)驗(yàn)表明基因沉默ADRM1表達(dá)能在體外抑制MHCC97-H細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移能力，并導(dǎo)致細(xì)胞周期G0/G1期阻滯和自發(fā)凋亡增多;在上述三種肝癌細(xì)胞中(Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H)，核內(nèi)NF-κB p65表達(dá)水平逐漸升高，與ADRM1表達(dá)趨勢(shì)一致，而IκB-α表達(dá)水平逐漸降低?；虺聊珹DRM1后，MHCC97-H細(xì)胞核內(nèi)NF-κ

7、B p65蛋白表達(dá)下調(diào)，IκB-α蛋白表達(dá)水平上升，但I(xiàn)κB-αmRNA表達(dá)無(wú)明顯變化。最為重要的是，基因沉默ADRM1后MHCC97-H細(xì)胞NF-κB活性水平下降。
　　 結(jié)論:ADRM1在肝細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，并且其表達(dá)水平與肝癌靜脈侵犯密切相關(guān);ADRM1在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)水平與細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力相關(guān);針對(duì)ADRM1的特異性基因沉默能在體外顯著抑制肝癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移能力，并且能上調(diào)自發(fā)凋亡水平，引發(fā)細(xì)胞周期G0/G1