肝細(xì)胞癌組織中RASSF1A、APC、WIF-1及RNF180蛋白表達(dá)及意義.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC，簡稱肝癌)是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，近年來肝癌的發(fā)病率及病死率逐漸升高，但其致病原因及發(fā)病機(jī)制尚未明確。隨著基因檢測技術(shù)及分子生物學(xué)的發(fā)展，對抑癌基因在腫瘤形成及發(fā)展過程中的作用越來越重視。本研究利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測肝癌及肝硬化組織中抑癌基因RASSF1A、APC、WIF-1及RNF180的表達(dá)，分析這些抑癌基因的表達(dá)與肝癌的臨床分期、生存預(yù)后的相關(guān)性，探討

2、這些抑癌基因在肝癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后評價中的作用。
　　 方法:
　　 1研究對象及標(biāo)本:河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院2002年12月至2011年6月手術(shù)切除并經(jīng)術(shù)后病理檢查確診的162例肝癌患者。男性135人，女性27人，年齡24歲～79歲，平均年齡57.23±7.26歲。按照2002年美國癌癥聯(lián)合委員會AGCC制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行腫瘤分期，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期分別為52、66、39和4例。共檢測268例標(biāo)本，其中86

3、例肝細(xì)胞癌及對應(yīng)的30例癌旁肝硬化組織標(biāo)本行RASSF1A、APC、WIF-1免疫組化染色，76例肝細(xì)胞癌及其對應(yīng)的76例癌旁肝硬化行RNF180免疫組化染色。隨訪所有患者，隨訪起始日期為術(shù)后第一天，隨訪截止日期為2013年1月1日。
　　 2免疫組化染色:所有標(biāo)本石蠟包埋，采用ABC法檢測RASSF1A、APC蛋白表達(dá)，采用SP法檢測WIF-1、RNF180蛋白表達(dá)。具體步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，免疫組織化學(xué)結(jié)果判定采用半定量法

4、。
　　 3統(tǒng)計(jì)處理:采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1RASSF1A、APC、WIF-1及RNF180蛋白在肝細(xì)胞癌組織及癌旁組織中的表達(dá)
　　 RASSF1A免疫組化陽性著色位于細(xì)胞漿，呈黃色或棕褐色，RASSF1A在肝癌組織中陽性表達(dá)率為63.95％，在癌旁組織中的陽性表達(dá)率為83.33％，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.048＜0.05)。APC蛋白免疫組化染色以細(xì)胞漿棕

5、褐色著色為陽性表達(dá)，APC在肝癌組織中的陽性表達(dá)率為67.44％，在癌旁組織中的陽性表達(dá)率為86.67％，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014＜0.05)。WIF-1免疫組化以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色為陽性，WIF-1蛋白在肝癌組織中的陽性表達(dá)率為23.26％，在癌旁組織中的陽性表達(dá)率為66.67％，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.019＜0.05)。RNF180免疫組化特異性表達(dá)位于細(xì)胞漿，以胞漿內(nèi)染色為棕褐色或棕黃色為陽性表達(dá)。RNF

6、180在肝癌組織中的陽性率表達(dá)為39.47％,在癌旁肝硬化組化中的陽性表達(dá)率為86.84％，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.006＜0.05)。
　　 2RASSF1A、APC、WIF-1及RNF180蛋白在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征及分期的關(guān)系
　　 伴有門靜脈瘤栓的肝細(xì)胞癌組織中RASSF1A、APC、WIF-1蛋白表達(dá)明顯低于無門靜脈瘤栓的肝癌組織中的表達(dá)（P值均＜0.05）。RASSF1A及APC表達(dá)在

7、Ⅰ～Ⅱ分期肝癌中的表達(dá)明顯高于Ⅲ～Ⅳ期肝癌組織中的表達(dá)（P值均＜0.05）。RASSF1A在有包膜的肝癌組織中的表達(dá)高于無包膜的肝癌組織中的表達(dá)(P=0.021＜0.05)，在HBsAg呈陰性表達(dá)的肝細(xì)胞癌組織中APC表達(dá)明顯高于HBsAg呈陽性的組織(P=0.016＜0.05)，在腫瘤為單發(fā)的肝癌組織中WIF-1的表達(dá)明顯高于腫瘤多發(fā)的肝癌組織(P=0.027＜0.05)。RASSF1A、APC、WIF-1表達(dá)與患者性別、年齡、AFP

8、、Child-pugh分級、腫瘤大小均無關(guān)。RNF180蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別、Child-pugh分級、腫瘤大小、有無門靜脈瘤栓、病理分化程度、腫瘤個數(shù)、臨床分期、HBsAg是否呈陽性均為無關(guān)，但RNF180蛋白的陽性表達(dá)在AFP小于等于200ug/L肝細(xì)胞癌中明顯高于AFP大于200ug/L肝細(xì)胞癌組織(P=0.031＜0.05)。
　　 3RASSF1A、APC、WIF-1及RNF180蛋白表達(dá)與生存期的關(guān)系

9、　　 RASSF1A表達(dá)陰性組的平均生存期為(33.56±4.26)個月，RASSF1A表達(dá)陽性組的平均生存期為(39.21±5.13)個月。二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.687＞0.05)。
　　 APC表達(dá)陰性組的平均生存期為(32.73±3.64)個月，APC表達(dá)陽性組的平均生存期為(40.69±5.36)個月。二者異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.217＞0.05)。
　　 WIF-1表達(dá)陰性組的平均生存期為(30.99

10、±4.06)個月，WIF-1表達(dá)陽性組的平均生存期為(36.58±5.31)個月，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.917＞0.05)。
　　 RNF180表達(dá)陰性組的平均生存期為(16.42±6.39)個月，RNF180表達(dá)陽性組的平均生存期為(20.40±5.86)個月，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002＜0.05)。
　　 多因素分析結(jié)果提示，AFP大小、有無門靜脈瘤栓、臨床分期、腫瘤個數(shù)和RNF180的表達(dá)為肝癌患

11、者獨(dú)立預(yù)后因素。
　　 結(jié)論:
　　 1RASSF1A、APC、WIF-1及RNF180蛋白在肝細(xì)胞癌組織中低表達(dá)，提示四個抑癌基因可能在一定程度上參與了肝細(xì)胞癌的發(fā)生。
　　 2伴有門靜脈瘤栓的肝細(xì)胞癌組織中RASSF1A、APC、WIF-1蛋白表達(dá)下調(diào)，說明RASSF1A、APC、WIF-1蛋白表達(dá)促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的進(jìn)展，癌組織低表達(dá)RASSF1A、APC、WIF-1蛋白者更易發(fā)生血管浸潤及轉(zhuǎn)移。