日本血吸蟲童蟲期別體被蛋白T輔助細胞表位預測及初步鑒定.pdf

1、日本血吸蟲病是一種危害嚴重的人畜共患寄生蟲病，嚴重影響我國包括農業(yè)和畜牧業(yè)在內的社會經濟的可持續(xù)發(fā)展，應用抗血吸蟲疫苗免疫人畜以阻斷血吸蟲病的傳播是公認的長期有效的控制策略。安全高效實用的血吸蟲分子疫苗的研發(fā)，由于鑒定保護性抗原遇到挑戰(zhàn)，一直難以突破。以模擬輻照致弱尾蚴疫菌誘導產生的、由Th1細胞介導的、靶向童蟲的高保護性免疫效應機制，來發(fā)現抗血吸蟲的分子疫苗，可能是重要的突破口之一。本研究應用反向疫苗學技術從日本血吸蟲轉錄本組中鑒別出

2、童蟲期別體表蛋白分子，預測其潛在的Th細胞表位，同時對其進行初步實驗鑒定，為進一步發(fā)現源于血吸蟲童蟲體被分子的保護性T細胞抗原奠定基礎。 本研究從國家人類基因組南方研究中心提供的日本血吸蟲肝童蟲期EST序列18，579條，從中篩選出童蟲期別體表蛋白373條，對其進行ORF識別，用基于人工神經網絡、隱馬爾科夫模型、及權重矩陣分析上述序列的信號肽及跨膜結構，從373條日本血吸蟲肝期童蟲體被蛋白序列中篩得14條具有ORF結構及信號肽結

3、構的序列。 應用免疫信息學技術進行候選序列Th細胞表位預測。應用基于結合基序、矩陣法和人工神經網絡等方法的多個服務器預測可與人源、鼠源潮MHCⅡ類分子結合的線性表位肽；應用基于分子動力學算法的受體配體嵌合空間結合模擬服務器，模擬肽與MHCⅡ分子的錨定情況，得到候選的Th細胞表位。結果預測得到了5個十五肽表位序列：NQFIRNLTLKIVLPE[源序列號AY813997；多萜基二磷酸寡聚糖蛋白葡萄糖基轉移酶類似物]；SSTSQDF

4、PGVCQLCV[AY815893；原鞘脂激活蛋白]；SSLVISYSTVDRLVC[源序列號AY815893；原鞘脂激活蛋白]；SRNLTVLRTNVALRL[源序列號AY811606；秀麗隱桿線蟲假象蛋白類似物]TVKFDKTVTCGGAYI[源序列號AAC00515；鈣網織蛋白家族]。 用人工合成多肽法(四分臂偶聯法合成到多聚賴氨酸骨架上)合成上述表位肽；MTT法改良技術CCK—8測定候選表位肽體外刺激免疫小鼠脾淋巴細胞增