日本血吸蟲不同蟲期蛋白組分的抗原特性研究.pdf

1、目的：研究日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)不同期蟲體經(jīng)化學裂解所獲得的蛋白組分及其抗原特性，為篩選出對于血吸蟲病的流行病學調(diào)查研究、預防及診治具有應用價值的抗原分子提供理論依據(jù)。探尋酶消化法收集純化蟲卵的適宜條件，使所獲蟲卵純度高，結(jié)構(gòu)相對完整，以便于進一步對其進行生物學特性的研究。 方法：以低溫(4℃)處理雌雄蟲減弱其動力方法分離雌、雄蟲，以反復凍融(-30℃)方法處理雌蟲盡可能除去其體內(nèi)的蟲卵，用化學

2、裂解的方法制備日本血吸蟲尾蚴、成蟲(雌蟲和雄蟲)以及蟲卵中的可溶性蛋白抗原，用十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS—PAGE')對不同期蟲體蛋白組分的相對分子量大小及分布范圍進行分析；以感染后不同時間的兔血清和免疫印跡試驗(Westemblotting)方法，對不同期蟲體蛋白組分的抗原特性進行免疫分析；利用反復過篩結(jié)合胰酶消化后離心沉淀純化收集血吸蟲卵，并和漂浮法純化蟲卵進行比較分析。 結(jié)果： (1)日本血吸蟲的不

3、同蟲期蛋白組分：蟲卵52條帶，其涉及的分子量范圍極廣，主要在61.0kD～97kD、19.0kD～35.1kD兩大區(qū)間，尤其在19.0kD～35.1kD區(qū)間處的蛋白分子含量極為豐富；其次是雄蟲48條帶，其分子量分布范圍主要為84.2kD,～97.2kD、61.0kD～76.8kD、48.4kD～55.6kD、27.8kD～35.1kD；雌蟲40條帶，其分子量主要分布范圍分別為25.6kD～27.6kD、27.8k D～35.1kD、61

4、.0kD～67.2kD，而尾蚴蛋白組分最少(約6條)其相對分子量分別為146kD、12lkD、78.1kD、66.8kD、55.6kD、36.6kD。 (2)可溶性尾蚴抗原(SCA)中78.1kD分子在與感染后6周兔血清免疫反應最強；雄蟲可溶性抗原(AWA-m)中的58.5kD、55.8kD、33.6～39.8kD分子與感染兔血清隨時間延長印跡反應增強；雌蟲可溶性抗原(AWA-f)中的55.8kD和26.1～33.3kD分子印跡

5、反應也是逐步增強；蟲卵SEA出現(xiàn)的免疫反應的分子為109.5kD、105.0kD、78.1～88.7kD、68.9kD、36.6kD、27.3kD，量多且逐步增強。 (3)酶消化法在適宜條件(37℃、0.25％胰酶、適當振搖)下，所收集純化的蟲卵結(jié)構(gòu)完整，得率高，純度可達99％以上。 結(jié)論：血吸蟲蟲體用化學裂解所獲得的可溶性蛋白經(jīng)SDS-PAGE顯示：不同蟲期、不同性別的蟲體，其蛋白組分具有差異性；免疫印跡結(jié)果表明：日本