消痰散結(jié)方對荷瘤大鼠蛋白質(zhì)代謝影響的實驗研究.pdf

1、代謝異常是惡性腫瘤重要并發(fā)癥，是惡性腫瘤治療困難、預(yù)后不佳的原因之一。改善代謝異常是提高患者生存質(zhì)量的治療關(guān)鍵。魏品康教授提出腫瘤“痰污染”假說，認(rèn)為代謝異常的物質(zhì)基礎(chǔ)是痰?，F(xiàn)代研究已證實腫瘤蛋白質(zhì)代謝異常與炎性因子有關(guān)。我科以“消痰散結(jié)”為法則，創(chuàng)立消痰散結(jié)方應(yīng)用于惡性腫瘤的臨床治療，取得了令人滿意的療效。因此，本實驗通過觀察消痰散結(jié)方對荷瘤大鼠炎性因子表達的調(diào)節(jié)作用，探討消痰散結(jié)方調(diào)整惡性腫瘤蛋白質(zhì)代謝異常的可能機制。
　　

2、 目的:通過建立Wistar大鼠皮下移植Walker256瘤模型，構(gòu)建惡性腫瘤痰污染環(huán)境，運用ELISA、EnVision、實時PCR等方法，檢測消痰散結(jié)方對痰濁中TNF-α、IL-6等炎性因子蛋白和mRNA表達的調(diào)控作用，探討消痰散結(jié)方調(diào)整惡性腫瘤蛋白質(zhì)代謝異常的作用機制，佐證腫瘤痰證理論的科學(xué)性以及腫瘤代謝異常的痰污染環(huán)境“痰濁”的物質(zhì)存在性。
　　 方法:30只Wistar大鼠，隨機分為正常對照組、空白組、消痰散結(jié)方組；除

3、正常對照組外，其余各組為荷瘤大鼠，皮下接種Walker256瘤，建立大鼠蛋白質(zhì)代謝異常模型。24h后消痰散結(jié)方組灌胃給藥(2ml/天,×4w)；正常對照組、空白組大鼠同期、同條件下一般飲食飼養(yǎng)；觀察實驗動物體重變化；第4周實驗結(jié)束時，麻醉解剖所有動物，心臟取血后檢測血清總蛋白、白蛋白水平，ELISA法檢測血清TNF-α、IL-6表達。取脛骨前肌組織、肝組織行Envision、實時PCR等方法檢測其中TNF-α、IL-6、NF-κb、泛素

4、等的蛋白和mRNA表達。
　　 結(jié)果:
　　 1.成功建立大鼠Walker256皮下移植瘤模型。移植術(shù)后7天左右可在皮下觸及較硬腫塊，后腫塊逐漸增大。荷瘤鼠逐漸出現(xiàn)皮毛干枯、少食、消瘦、倦怠乏力、行動遲緩等衰竭癥狀。HE染色證實荷瘤鼠骨骼肌結(jié)構(gòu)紊亂。
　　 2.荷瘤鼠因腫瘤而影響機體的正常生長，造模7天后各荷瘤鼠組體重增加值低于正常組(P＜0.05)；造模21天后消痰散結(jié)方組體重增加值高于空白組(P＜0.05)而

5、低于正常對照組(P＜0.05)。
　　 3.消痰散結(jié)方對血清總蛋白和白蛋白的影響：與正常組相比，空白組、消痰散結(jié)方組總蛋白未見明顯降低(P＞0.05)；各荷瘤鼠組白蛋白均較正常組有所下降(P＜0.05)，消痰散結(jié)方組高于空白組(P＜0.05)。
　　 4.消痰散結(jié)方對血清TNF-α蛋白表達的影響：各荷瘤鼠組血清中TNF-α蛋白表達均較正常對照組明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組血清TNF-α蛋白明顯低于空白組(P＜0

6、.05)。
　　 消痰散結(jié)方對血清IL-6蛋白表達的影響：各荷瘤鼠組血清中IL-6蛋白表達均較正常對照組明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組血清IL-6蛋白明顯低于空白組(P＜0.05)。
　　 5.消痰散結(jié)方對肌肉組織TNF-α蛋白表達的影響：各荷瘤鼠組肌肉組織中TNF-α蛋白表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組與空白組未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 消痰散結(jié)方對肌肉組織TNF

7、-α mRNA表達的影響：各荷瘤鼠組肌肉組織中TNF-α mRNA表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組與空白組未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 消痰散結(jié)方對肝臟組織TNF-α蛋白表達的影響：各荷瘤鼠組肝臟組織中TNF-α蛋白表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組低于空白組(P＜0.05)。
　　 消痰散結(jié)方對肝臟組織TNF-α mRNA表達的影響：各荷瘤鼠組肝臟組織中TNF

8、-α mRNA表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組低于空白組(P＜0.05)。
　　 6.消痰散結(jié)方對肌肉組織IL-6蛋白表達的影響：各荷瘤鼠組肌肉組織中IL-6蛋白表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 消痰散結(jié)方對肌肉組織IL-6 mRNA表達的影響：各荷瘤鼠組肌肉組織中IL-6 mRNA表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；

9、消痰散結(jié)方組與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 消痰散結(jié)方對肝臟組織IL-6蛋白表達的影響：各荷瘤鼠組肝臟組織中TNF-α蛋白表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組低于空白組(P＜0.05)。
　　 消痰散結(jié)方對肝臟組織IL-6 mRNA表達的影響：各荷瘤鼠組肝臟組織中TNF-α mRNA表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組低于空白組(P＜0.05)。
　　 7

10、.消痰散結(jié)方對肌肉組織NF-κb蛋白表達的影響：各荷瘤鼠組肌肉組織中NF-κb蛋白表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 消痰散結(jié)方對肌肉組織NF-κb mRNA表達的影響：各荷瘤鼠組肌肉組織中NF-κb mRNA表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 8.消痰散結(jié)方對肌肉組織泛素蛋白表達的

11、影響：各荷瘤鼠組肌肉組織中泛素蛋白表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組低于空白組(P＜0.05)。
　　 消痰散結(jié)方對肌肉組織泛素mRNA表達的影響：各荷瘤鼠組肌肉組織中泛素mRNA表達較正常對照組均明顯升高(P＜0.05)；消痰散結(jié)方組低于空白組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.建立的大鼠Walker256皮下移植瘤模型，制作方法簡單，成瘤率高，具有與臨床惡性腫瘤代謝異常類似的表現(xiàn)

12、。
　　 2.消痰散結(jié)方可提高荷瘤大鼠的體重及血清白蛋白水平。
　　 3.荷瘤鼠血清、肌肉組織、肝臟組織中TNF-α、IL-6等炎性因子表達升高，證實炎性因子與腫瘤蛋白質(zhì)代謝異常密切相關(guān)。
　　 4.消痰散結(jié)方可下調(diào)荷瘤大鼠肝臟組織中TNF-α、IL-6等炎性因子的表達，調(diào)控肝臟的蛋白合成，下調(diào)荷瘤大鼠肌肉組織中泛素的表達，調(diào)控骨骼肌ATP-泛素蛋白酶體途徑，是其清化腫瘤痰污染環(huán)境，改善腫瘤代謝異常的可能機制之一