凝血因子Ⅶ基因多態(tài)性及啟動(dòng)子區(qū)甲基化在顱腦創(chuàng)傷性凝血功能障礙發(fā)生中的作用.pdf

1、本課題分兩部分,分別從凝血因子Ⅶ(factorⅦ,FⅦ)基因多態(tài)性和啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平兩個(gè)方面研究了急性顱腦創(chuàng)傷(traumatic brain injury,TBI)后FⅦ活性(activated factorⅦ,FⅦa)水平及發(fā)生凝血功能障礙的影響因素。各部分研究摘要如下:
　　第一部分凝血因子Ⅶ基因多態(tài)性在顱腦創(chuàng)傷性凝血功能障礙中的作用
　　目的:闡述FⅦ基因多態(tài)性對TBI患者血漿FⅦa水平的影響,分析不同基因型與TB

2、I后凝血功能障礙之間的相關(guān)性。
　　方法:收集符合入選條件的84例單純性TBI患者血液,測定傷后24小時(shí)內(nèi)血漿FⅦa水平,同時(shí)檢測國際標(biāo)準(zhǔn)化比值和活化部分凝血酶原時(shí)間等凝血指標(biāo)。對患者血液基因組進(jìn)行提取,并運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)以及限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法檢測FⅦ的-323P

3、0/P10、R353Q、-401G/T、-402G/A、-670A/C和IVS7六個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的基因型,建立二元和多元回歸模型,尋找關(guān)鍵的影響FⅦa水平的多態(tài)性位點(diǎn),并確定其與TBI患者凝血功能異常之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:FⅦ多態(tài)性位點(diǎn)-323P0/P10、R353Q、-401G/T、IVS7不同基因型之間的FⅦa差異顯著(P<0.05),而在-402G/A和-670A/C兩個(gè)位點(diǎn)各基因型之間差異不顯著(P>0.05)。-323P

4、0/P10的P10等位基因、R353Q的Q等位基因、IVS7的H7等位基因是FⅦa低于77.5％的危險(xiǎn)因素。多變量邏輯回歸分析,結(jié)果顯示R353Q的Q等位基因[優(yōu)勢比(odds ratio,OR)=4.401,95％可信區(qū)間(confidence interval,CI)=1.275~15.190,P=0.019)]是導(dǎo)致FⅦa<77.5％的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。-323P0/P10的P10等位基因(OR=12.323,95％CI=1.445~

5、105.062,P=0.022)是導(dǎo)致TBI患者繼發(fā)凝血功能障礙的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。單倍型為P10-H7-Q的患者發(fā)生凝血病的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于其他單倍型患者(OR=7.624,95％CI=1.325~43.888,P=0.037)。
　　結(jié)論:R353Q的Q等位基因與FⅦa下降密切相關(guān),而-323P0/P10的P10等位基因可作為獨(dú)立因素導(dǎo)致TBI患者發(fā)生凝血病。同時(shí),單倍型為P10-H7-Q的患者發(fā)生凝血病的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于其他單倍型患者。

6、
　　第二部分凝血因子Ⅶ啟動(dòng)子區(qū)甲基化在顱腦創(chuàng)傷性凝血功能障礙中的作用
　　目的:研究TBI患者FⅦ啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平對血漿FⅦa水平的影響,及其與繼發(fā)凝血功能障礙之間的相關(guān)性。
　　方法:收集符合入選條件的84例單純性TBI患者血液,測定傷后24小時(shí)內(nèi)血漿FⅦa水平,同時(shí)檢測國際標(biāo)準(zhǔn)化比值和活化部分凝血酶原時(shí)間等凝血指標(biāo)。甲基化百分比參數(shù)(percentage of methylated reference,PMR)

7、以4為臨界點(diǎn),PMR>4定義為甲基化。對患者血液基因組進(jìn)行提取,并進(jìn)行亞硫酸氫鹽處理,運(yùn)用甲基化熒光檢測(Methylight)方法定量檢測FⅦ啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平,確定FⅦ啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度與FⅦa水平和凝血功能異常之間的關(guān)系。最后將FⅦ基因多態(tài)性納入回歸分析。
　　結(jié)果:采用Spearman相關(guān)性分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)代表FⅦ啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平的PMR值與FⅦa呈顯著的負(fù)相關(guān)(R=-0.249,P=0.027),且PMR在凝血病組中為

8、5.98±7.32,顯著高于無凝血病患者(2.09±1.98)(P=0.001)。運(yùn)用雙變量回歸分析,發(fā)現(xiàn)升高的PMR為FⅦa<77.5％和發(fā)生凝血病的顯著危險(xiǎn)因素。聯(lián)合FⅦ基因多態(tài)性和啟動(dòng)子區(qū)甲基化分析與FⅦa及凝血病的關(guān)系,結(jié)果顯示:(1)-323P0/P10的P10等位基因、R353Q的Q等位基因、IVS7的H7等位基因及PMR>4是FⅦa低于77.5％的危險(xiǎn)因素,而除外-401G/T的T等位基因等。逐步回歸分析結(jié)果表明,IVS7

9、的H7等位基因(OR=5.024,95％CI=1.143~22.076,P=0.033)是導(dǎo)致FⅦa<77.5％的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;(2)運(yùn)用邏輯回歸分析凝血病的危險(xiǎn)因素,發(fā)現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)<150×109/L,活化部分凝血酶時(shí)間>32 s以及PMR>4是發(fā)生凝血病的危險(xiǎn)因素,而除外-323P0/P10的P10等位基因、R353Q的Q等位基因、IVS7的H7等位基因、-401G/T的T等位基因、年齡>50歲、硬膜外血腫及蛛網(wǎng)膜下腔出血等因素。多