Th22細(xì)胞及細(xì)胞因子IL-22在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制中的意義初探.pdf

1、第一部分、外周血Th22細(xì)胞及白介素-22在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中的表達(dá)及其臨床意義
　　背景和目的：T細(xì)胞異?；罨蚑輔助細(xì)胞(T helper，Yh)異常分泌細(xì)胞因子是被認(rèn)為是SLE發(fā)病的重要機(jī)制之一。對SLE患者中存在的Th1/Th2細(xì)胞比例失衡已有多篇報(bào)道。盡管研究結(jié)果有不同，但總體認(rèn)為Th1和Th2在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)相關(guān)免疫SLE相關(guān)的免疫損傷中均發(fā)揮作用，

2、分別在不同階段占主導(dǎo)作用。Th17細(xì)胞可能參與SLE病理機(jī)制已在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。與SLE組織損傷及自身抗體的形成密切相關(guān)。Th22細(xì)胞是最近發(fā)現(xiàn)新的一群T細(xì)胞亞群，Th22能分泌IL-22、IL-26、IL-13等細(xì)胞因子，其中IL-22是最主要效應(yīng)因子。研究發(fā)現(xiàn)，Th22參與銀屑病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性硬化癥等慢性炎癥性疾病的發(fā)病。但Th22在SLE中的作用尚未明確。本研究采用流式細(xì)胞儀檢測SLE患者外周血Th22、Th17細(xì)胞及

3、其IL-17、IL-22等的表達(dá)水平及分析其臨床意義。
　　方法：
　　1.資料來源:明確診斷SLE的患者65人，同期年齡性別匹配的正常健康對照者30人。
　　2.診斷標(biāo)準(zhǔn):疾病診斷和分類根據(jù)ACR修訂SLE診斷和分類標(biāo)準(zhǔn)及SLE活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI):根據(jù)2000評(píng)分體系評(píng)價(jià)患者疾病活動(dòng)性，并按疾病活動(dòng)性及臟器受累情況進(jìn)行分組。
　　3.實(shí)驗(yàn)方法:采集抗凝外周靜脈血20mL。分離抗凝血外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMC

4、。采用流式細(xì)胞儀檢測Th17、Th22等細(xì)胞的表達(dá)量，ELISA法檢測患者血清IL-17、IL-22的表達(dá)水平。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)學(xué)方法:使用SPSS19.0軟件包進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，正態(tài)分布資料兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或配對t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素ANOVA方差分析，相關(guān)分析采用pearson相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn);非正態(tài)分布資料兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，相關(guān)分

5、析采用spearman相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05作為檢驗(yàn)差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1.SLE患者外周血Th17細(xì)胞比例明顯高于健康對照組（2.05±1.01％ vs.1.13±0.65％， p=0.003），其中活動(dòng)性SLE患者Th17細(xì)胞比例明顯高于非活動(dòng)性SLE患者（2.32±1.00％ vs.1.12±0.37，p=0.001）。其中僅有皮膚損害和有腎臟損害的SLE患者Th17細(xì)胞比例均明顯高于健康對照組(2.

6、02±0.82％和1.98±0.62％ vs.1.13±0.65％, P=0.000和0.000)2.SLE患者外周血Th22、Th1細(xì)胞比例與健康對照組比較無顯著性差異，但僅有皮膚損害的SLE患者Th22細(xì)胞比例高于健康對照組（2.03±1.02％ vs.1.28±0.40％，P=0.000），而僅有腎臟損害的SLE患者Th22細(xì)胞比例低于健康對照組(0.60±0.19％ vs.1.28±0.40％，P=0.020)。Th1細(xì)胞比例在

7、兩組損害患者間及與健康對照組比較均無顯著性差異。其中僅有皮膚損害或僅有腎臟損害的SLE患者Th1細(xì)胞比例與健康對照組比較也均無明顯差異。
　　3.SLE患者外周血清IL-22水平與健康對照組比較無差異性。但僅有皮膚損害SLE患者血清IL-22水平高于健康對照組[平均值289.34pg/ml(89.70-531.70);P=0.001]，僅有腎臟損害的SLE患者血清IL-22水平低于健康對照組[平均值82.44pg/ml(36.80

8、-178.50);P=0.024]。
　　4.SLE患者外周血清IL-17水平高于健康對照組[平均值73.08pg/ml(17.00-176.00)] vs.[平均值46.76pg/ml(16.05-173.20)，P=0.001]，活動(dòng)組高于非活動(dòng)組患者[平均值82.44pg/ml(53.05-176.00)] vs.[平均值41.02 pg/ml(17.00-156.70)， P=0.002]。僅有皮膚損害和僅有腎臟損害的SL

9、E患者外周血清IL-17水平均高于健康對照組[平均值77.78 pg/ml(35.00-172.00);P=0.004]和[平均值85.20 pg/ml(23.10-160.40);P=0.000]。
　　5.Th22細(xì)胞與血清IL-22水平呈正相關(guān)(r=0.855，p=0.000)，Th17細(xì)胞與血清IL-17水平呈正相關(guān)(r=0.771，p=0.000)。
　　6.Th17細(xì)胞、血清IL-17水平與SLE活動(dòng)指數(shù)(SLE

10、DAI)呈正相關(guān)(r=0.279，p=0.012; r=0.211，p=0.046)。而Th22、Th1和IL-22與SLEDAI指數(shù)無相關(guān)性(p=0.120,p=0.070和p=0.280)。
　　結(jié)論：
　　1.活動(dòng)性SLE患者外周血中伴有Th17細(xì)胞比例增高及其細(xì)胞因子IL-17水平升高，與SLE活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)相關(guān)，可以作為輔助標(biāo)志物對疾病活動(dòng)的提供預(yù)測。
　　2.外周血Th22細(xì)胞及其細(xì)胞因子IL-2

11、2與SLE患者受累臟器相關(guān)，僅有皮膚受損SLE患者Th22細(xì)胞比例及其細(xì)胞因子IL-22水平升高，而僅有腎臟損害的SLE患者Th22細(xì)胞比例及IL-22水平下降，因此，Th22細(xì)胞及IL-22可以作為組織受累的輔助標(biāo)志物。
　　第二部分、IL-22及IL-22R在MRL/Ipr狼瘡鼠中的表達(dá)
　　背景和目的：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythometasus，SLE）是一種炎癥性疾病，其發(fā)生發(fā)展和種多因

12、素有關(guān)，其中細(xì)胞因子是一個(gè)關(guān)鍵因素。致炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子之間失衡的程度決定了炎癥嚴(yán)重性和范圍。盡管關(guān)于細(xì)胞因子在SLE中的作用研究很多，但細(xì)胞因子之間的相互作用錯(cuò)綜復(fù)雜，目前仍有尚未闡明各種細(xì)胞因子在SLE中作用。
　　IL-22是IL-10細(xì)胞因子家族成員之一，其受體為一異源性二聚體，由IL-10受體β鏈(IL-10R2)、IL-22R1兩條鏈組成。IL-22結(jié)合的特異性由IL-22R1決定。IL-22具有獨(dú)特的作用，它由

13、免疫細(xì)胞產(chǎn)生，但并不作用于這些免疫細(xì)胞，而是作用于組織細(xì)胞。作為一個(gè)獨(dú)特細(xì)胞因子，IL-22在炎癥性疾病和自身免疫性疾病中的作用越來越多重視。研究表明IL-22在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮促炎和抗炎兩種作用。例如，在銀屑病小鼠模型，IL-22被證實(shí)介導(dǎo)皮膚炎癥;相反，在潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型上的研究顯示IL-22減輕腸道炎癥。
　　在第一部分臨床研究中我們發(fā)現(xiàn)SLE患者外周血IL-22水平與健康對照組比較沒有明顯差異，但分層分析后發(fā)現(xiàn)皮膚型SL

14、E患者和狼瘡腎炎患者血清中IL-22表達(dá)出現(xiàn)截然不同的結(jié)果，為進(jìn)一步證實(shí)IL-22是否參與SLE發(fā)病，是否與受累的組織相關(guān)，本部分以SLE的MRL/lpr小鼠為研究對象，檢測IL-22及其受體(IL-22R1)在狼瘡鼠中的表達(dá)。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為清潔級(jí)雌性MRL/lpr轉(zhuǎn)基因小鼠和年齡匹配的雌性C57BL/6J近交系小鼠。分別在6、12、18周齡時(shí)麻醉眼眶取血清和摘取腎臟和淋巴組織，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):
　　1.對

15、腎組織進(jìn)行常規(guī)HE染色、PAS染色、Masson染色，以評(píng)價(jià)小鼠腎臟病理學(xué)損害程度。
　　2.對腹腔淋巴組織進(jìn)行了常規(guī)HE染色。
　　3.用酶聯(lián)免疫吸附劑測定（Enzyme liked immunosorbent assay, ELISA）血清抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體滴度和血清IL-22水平。
　　4.用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-Polymerase chainreacti

16、ons)法測定小鼠腎臟IL-22、IL-22RmRNA表達(dá)水平。
　　5.用免疫組化法對IL-22、IL-22R在小鼠腎臟中的表達(dá)進(jìn)行定位。
　　結(jié)果:
　　1.MRL/lpr小鼠血清抗dsDNA的滴度隨著病程的延長而上升，明顯高于同齡C57BL/6J小鼠。
　　2.同樣，隨著病程的延長，MRL/lpr小鼠腎臟的組織病理損害加重。6周齡MRL/lpr小鼠未出現(xiàn)腎臟損害;12周齡出現(xiàn)少量蛋白管型，腎小球系膜細(xì)胞和內(nèi)

17、皮細(xì)胞中度增生，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤;18周齡出現(xiàn)大量蛋白管型和重度系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增生，并形成新月體。而在任何年齡段的C57BL/6J小鼠中，未見蛋白管型，也均未發(fā)現(xiàn)其腎臟組織出現(xiàn)明顯病理學(xué)改變。
　　3.MRL/lpr小鼠淋巴組織病理也隨著病程的延長而改變明顯，顯示淋巴中心增大。
　　4.MRL/lpr小鼠血清IL-22水平，與同齡的C57BL/6J小鼠相比較無明顯差異。
　　5.MRL/lpr小鼠腎臟中IL-22、

18、IL-22RmRNA表達(dá)水平明顯高于同齡的C57BL/6J小鼠，有顯著性差異。
　　6.MRL/lpr小鼠腎臟中IL-22、IL-22R表達(dá)呈強(qiáng)陽性，尤其在細(xì)胞增生明顯的腎小球呈高表達(dá);而在C57BL/6J小鼠腎臟組織不明顯。
　　7.MRL/lpr和C57BL/6J小鼠的淋巴組織中均未見有IL-22、IL-22R表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1、MRL/Ipr小鼠呈現(xiàn)出狼瘡腎具有的血清學(xué)和組織病理學(xué)改變。