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1、研究背景:神經(jīng)病理性疼痛是由于中樞或外周神經(jīng)損傷及炎癥所引起的慢性疼痛,表現(xiàn)為痛覺(jué)過(guò)敏、痛覺(jué)超敏及自發(fā)性疼痛。雖然國(guó)內(nèi)外已經(jīng)進(jìn)行了大量研究,但其機(jī)制仍然很不清楚。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)損傷后損傷纖維的Wallerian變性及局部炎癥刺激產(chǎn)生的致炎細(xì)胞因子,如白介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF)等在病理性疼痛的產(chǎn)生和維持階段發(fā)揮重要作用,而IL-1和TNF的合成,以及其作用的發(fā)揮都與核因子-kappa B(NF-kB)的激活密切相
2、關(guān),但目前有關(guān)NF-kB在神經(jīng)病理性疼痛中的作用的研究還很不完善。
目的:采用腰5脊神經(jīng)結(jié)扎(L5 SNL)引起的神經(jīng)病理性疼痛模型,通過(guò)鞘內(nèi)或腹腔注射N(xiāo)F-kB激活抑制劑PDTC,研究NF-kB在大鼠神經(jīng)病理性疼痛中的作用;并進(jìn)一步采用免疫熒光組織化學(xué)和免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)觀察NF-kB在L5和L4背根神經(jīng)節(jié)(DRG)的激活及激活的細(xì)胞類(lèi)型。
方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用成年雄性SD大鼠。首先在L5 SNL手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn),鞘
3、內(nèi)或腹腔注射不同劑量的NF-kB激活抑制劑PDTC,通過(guò)行為學(xué)測(cè)試觀察NF-kB在神經(jīng)病理性疼痛的作用。然后通過(guò)免疫熒光組織化學(xué)方法觀察L5 SNL術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)NF-kB在L5及L4 DRG的激活程度,并進(jìn)一步采用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)觀察NF-kB激活的細(xì)胞類(lèi)型。本實(shí)驗(yàn)中行為學(xué)測(cè)試采用up-down方法來(lái)測(cè)試大鼠的50%機(jī)械刺激撤足閾值,用熱輻射測(cè)試儀測(cè)試熱刺激撤足潛伏期。免疫組織化學(xué)結(jié)果通過(guò)計(jì)算NF-kB-免疫活性(IR)陽(yáng)性細(xì)胞的百分
4、比來(lái)定量分析。
結(jié)果:1.行為學(xué)測(cè)試結(jié)果顯示:L5 SNL可引起大鼠手術(shù)同側(cè)后肢機(jī)械刺激痛覺(jué)超敏和熱刺激痛覺(jué)過(guò)敏;L5 SNL術(shù)前0.5h鞘內(nèi)或腹腔注射PDTC(1ug/10ul,100mg/kg),而后每天1次,持續(xù)7d,能完全阻斷L5 SNL引起的痛覺(jué)超敏及痛覺(jué)過(guò)敏;L5 SNL術(shù)后1d開(kāi)始鞘內(nèi)注射PDTC(1ug/10ul),每天1次,持續(xù)7d,也可阻斷L5 SNL誘導(dǎo)的痛覺(jué)超敏及痛覺(jué)過(guò)敏;L5 SNL術(shù)后7d開(kāi)始鞘內(nèi)注
5、射PDTC(1ug/10ul),每天1次,至術(shù)后14d,對(duì)已經(jīng)建立起來(lái)的痛覺(jué)超敏及痛覺(jué)過(guò)敏均無(wú)顯著影響。2.免疫熒光組化結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,L5 SNL術(shù)后1d手術(shù)同側(cè)L5及L4 DRG中NF-kB-IR陽(yáng)性細(xì)胞百分比增加,3d達(dá)到高峰,并保持到術(shù)后14d左右;術(shù)前0.5h開(kāi)始鞘內(nèi)注射PDTC(1ug/10ul),而后每天1次,持續(xù)3d,可以抑制L5 DRG細(xì)胞中NF-kB的激活。3.免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示NF-kB激活于衛(wèi)星樣膠質(zhì)
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