單環(huán)刺螠纖溶酶UFEⅠ的酶學(xué)性質(zhì)和初步藥效學(xué)及安全性評價.pdf

1、血栓栓塞性疾病(thrombotic disease,TD)是嚴(yán)重危害公眾健康的常見病與多發(fā)病,主要危害心、腦,肺等血管系統(tǒng),具有較高的發(fā)病率、致殘率和致死率。目前,藥物溶栓是臨床應(yīng)用上主要的治療手段。雖然溶栓劑已經(jīng)發(fā)展了三代,但仍然存在諸多副作用,如特異性降解纖維蛋白能力低,易誘發(fā)機體出血等。因此,尋找和開發(fā)更為安全有效的新型溶栓劑是治療血栓性疾病的重要內(nèi)容。
　　 本實驗室經(jīng)過多年對海洋無脊椎動物單環(huán)刺螠(Urchis un

2、icinctus)的探索研究,得到一種分子量為26 kDa的纖溶酶,并對其溶栓活性進行了研究,報道了該酶具有直接降解血栓纖維蛋白的能力,溶栓效果優(yōu)于蚓激酶。本文將對分離純化得到的新組分UFEⅠ進行研究,進一步豐富對單環(huán)刺蝣體內(nèi)活性物質(zhì)的相關(guān)認(rèn)識。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.酶組分UFEⅠ經(jīng)SDS-PAGE電泳呈單一條帶,測定其相對分子質(zhì)量約為45kDa；IEF電泳圖譜測定其pI值為4.58。
　　 2.UFEⅠ酶學(xué)性質(zhì)

3、研究:最適反應(yīng)溫度為50℃,最適反應(yīng)pH為8.5；酶活力在50℃以下范圍內(nèi)具有良好的熱穩(wěn)定性,在pH7.0-9.0內(nèi)相對穩(wěn)定；Mn2+和Fe3+是該酶的抑制劑,EDTA可以強烈抑制該酶的活力；纖維蛋白原為UFEⅠ的最適作用底物；米氏常數(shù)Km=1.02 mg／mL,最大反應(yīng)速率Vmax=34.5μg／min·mL。
　　 3.UFEⅠ具有直接纖溶活性和激酶活性。以纖維蛋白平板法,參照尿激酶標(biāo)準(zhǔn)品,測得該酶的總纖溶活力為每mg酶含3

4、02.9個尿激酶活力單位,其中激酶活性為每mg酶含177.6個尿激酶活力單位,約占酶總纖溶活力的41.4％。
　　 4.體外抗凝指標(biāo)的檢測初步推斷UFEⅠ的體外抗凝血作用于內(nèi)凝血途徑和共同凝血途徑,并可降低纖維蛋白原含量,抑制血栓的形成；體外定量溶栓實驗表明,UFEⅠ具有體外直接溶解纖維蛋白的能力。
　　 5.根據(jù)對UFEⅠ降解纖維蛋白原產(chǎn)物分析,發(fā)現(xiàn)該酶可以迅速降解γ鏈,隨后于4 h完全降解β鏈,推測UFEⅠ為γ-纖溶

5、酶。
　　 6.UFEⅠ對小鼠體內(nèi)凝血時間的影響表明,該酶能夠顯著延長小鼠體內(nèi)凝血時間,具有抗凝血作用。大鼠頸動脈血栓實驗表明,UFEⅠ具有顯著延長大鼠體內(nèi)血栓形成時間的作用,并通過影響內(nèi)源性凝血途徑和血小板的聚集,及其較強的纖溶活力發(fā)揮抗凝作用,抑制血栓的形成。
　　 7.溶血性實驗、急性毒性實驗顯示,UFEⅠ不引起機體出現(xiàn)任何溶血反應(yīng),不會造成機體出現(xiàn)出血傾向,無急性毒性。
　　 8.UFEⅠ的免疫原性研究顯