孕激素膜受體1在卵巢癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：孕激素膜受體1（PGRMC1）是脊椎動物的保守蛋白，廣泛存在于真核生物中。PGRMC1異常高表達(dá)在卵巢癌發(fā)展中起重要作用。凋亡抑制蛋白Survivin在卵巢癌的發(fā)生中也有著一定的關(guān)系，目前關(guān)于二者在卵巢癌中的調(diào)控的研究目前尚未見報(bào)道。檢測PGRMC1在卵巢癌組織中的表達(dá)情況。在OVCAR3細(xì)胞中下調(diào)PGRMC1的表達(dá)，觀察高濃度孕激素作用于卵巢癌OVCAR-3后增殖情況，檢測Survivin、PGRMC1mRNA表達(dá)情況，探討PG

2、RMC1在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，以及與Survivin的關(guān)系，為卵巢癌防治提供新的理論依據(jù)。
　　方法：（1）免疫組織化學(xué)染色（EnVision法）及Image-ProPlus圖像分析軟件，觀察PGRMC1在卵巢漿液性囊腺癌組織、卵巢漿液性囊腺瘤、卵巢交界性腫瘤和正常輸卵管上皮組織中的表達(dá)情況。（2）以人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞系OVCAR-3為研究對象，首先在37℃，5％CO2，20% O2和95%濕度條件下培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞，

3、提取生長指數(shù)期細(xì)胞，且生長良好的細(xì)胞進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組：空白對照組（加入含有血清及雙抗的培養(yǎng)基）、脂質(zhì)體組（加入脂質(zhì)體，余同空白組）、干擾1組（加入PGRMC1-SiRNA+余同空白組）、干擾2組（加入PGRMC1-SiRNA+MPA+余同空白組）、孕激素組（加入孕激素10-3mmol/l+余同空白組），培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)后，MTT檢測各組的OVCAR3細(xì)胞的增殖情況，RT-PCR檢測PGRMC1、Survivin的mRNA相對表達(dá)情

4、況。（3）卡方檢驗(yàn)判斷PGRMC1表達(dá)與各個(gè)臨床病理指標(biāo)的相互關(guān)系，各組數(shù)據(jù)以錯(cuò)誤!未找到引用源。表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析；隨訪材料的患者生存情況用Kaplan-Meier方法進(jìn)行分析，生存率比較用Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)使用SPSS18.0軟件處理。
　　結(jié)果：（1）PGRMC1在正常組、良性組、交界組、惡性組的陽性表達(dá)量（錯(cuò)誤!未找到引用源。）為：0.018±0.008、0.021±0

5、.007、0.032±0.010、0.047±0.019，惡性組的陽性表達(dá)量高于交界組、良性組、正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,交界組的陽性表達(dá)量高于正常組、良性組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說明在PGRMC1的陽性表達(dá)量隨著惡性增高而增高，有助于鑒別良惡性卵巢腫瘤。（2）PGRMC1在正常組、良性組、交界組、惡性組的陽性表達(dá)率為：20％（2/10）、30％（3/10）、50％（5/10）、72.5％（29/40）

6、。惡性組的陽性表達(dá)率高于交界組、良性組、正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。交界組陽性表達(dá)率高于良性組、正常組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說明PGRMC1陽性表達(dá)率在惡性組表達(dá)多，有助于卵巢良惡性腫瘤的鑒別。（3）PGRMC1的表達(dá)與卵巢癌腫瘤大小、病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P＜0.05），與年齡（P＞0.05）無關(guān)。提示腫瘤直徑越大、病理分級越高、臨床分期越晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，其PGRMC1的陽性表達(dá)率越高

7、。（4）PGRMC1陽性表達(dá)率與卵巢漿液性囊腺癌的術(shù)后生存率（Log-rank=5.719；P=0.017）呈負(fù)相關(guān)，提示 PGRMC1陽性表達(dá)的患者，術(shù)后生存率較低。（5）OVCAR3細(xì)胞在空白組、脂質(zhì)體組、干擾1組、干擾2組、孕激素組的增殖率為24.84±1.11、25.14±0.64、20.44±0.32、14.54±0.24、18.42±0.27。干擾1組、干擾2組、孕激素組的增殖率低于脂質(zhì)體組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）

8、，說明孕激素、下調(diào)PGRMC1的表達(dá)后，能夠抑制 OVCAR3的細(xì)胞存活。孕激素組的增殖率高于干擾2組，說明 PGRMC1-SiRNA能夠抑制細(xì)胞的存活，PGRMC1能促進(jìn)卵巢腫瘤細(xì)胞的增殖。（6）PCR結(jié)果提示：Survivin mRNA在空白組、脂質(zhì)體組、干擾1組、干擾2組、孕激素組的相對表達(dá)含量分別為0.27±0.01、0.25±0.01、0.18±0.01、0.04±0.01、0.10±0.09。PGRMC1 mRNA在空白組、

9、脂質(zhì)體組、干擾1組、干擾2組、孕激素組的相對表達(dá)含量分別為0.26±0.04、0.20±0.06、0.14±0.02、0.05±0.01、0.13±0.04。脂質(zhì)體組中Survivin、PGRMC1的mRNA與各個(gè)實(shí)驗(yàn)相比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　（1）PGRMC1在卵巢漿液性囊腺癌中高表達(dá)，有助于良惡性卵巢腫瘤的鑒別。
　?。?）PGRMC1的陽性表達(dá)與卵巢癌惡性程度有關(guān)，提示腫瘤體積越大、