Kallikrein 6在卵巢癌中的表達(dá)、調(diào)控及臨床意義.pdf

1、目的:卵巢癌是常見婦科惡性腫瘤之一，由于起病隱匿，缺乏早期診斷的有效指標(biāo)，晚期治療效果差，嚴(yán)重威脅婦女健康。目前有關(guān)卵巢癌發(fā)生的確切機(jī)制尚未明確，流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)分泌因素、遺傳因素、不良的營(yíng)養(yǎng)和飲食習(xí)慣等是卵巢腫瘤重要的危險(xiǎn)因素。因此，積極借助最新分子生物學(xué)技術(shù)，從基因水平上探討卵巢癌的發(fā)生機(jī)制及卵巢癌相關(guān)基因的功能，尋找有關(guān)卵巢癌早期診斷、預(yù)后監(jiān)測(cè)的新指標(biāo)是目前卵巢癌研究中至關(guān)重要的課題。KLK基因家族是近來新發(fā)現(xiàn)的一類與性激素相

2、關(guān)的腫瘤標(biāo)記家族，KLK6基因是該家族成員之一，編碼的蛋白hK6是由223個(gè)氨基酸組成的絲氨酸蛋白酶，具有胰蛋白酶樣活性，與卵巢癌關(guān)系密切。本課題通過雌激素調(diào)控體外培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞株，觀察雌激素對(duì)KLK6基因以及卵巢癌細(xì)胞牛物學(xué)性狀的影響，以初步探討KLK6基因在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用及功能；同時(shí)通過免疫組化SP法檢測(cè)KLK6基因編碼的蛋白hK6在卵巢癌中的表達(dá)及與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系，探討其臨床意義。 方法:1．四種不同濃

3、度(1×10<'-10>、1×l0<'-9>、1×10<'-8>、1×10<'-7>mol/L)的17β-E<,2>作用于體外培養(yǎng)的卵巢癌H08910細(xì)胞株72小時(shí)后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)KLK6 mRNA和蛋白的表達(dá)變化，流式細(xì)胞儀和MTT法檢測(cè)調(diào)控前后H08910細(xì)胞增殖周期和細(xì)胞增殖活力的改變，初步探討KLK6基因的功能及其在卵巢癌發(fā)牛發(fā)展中的作用。 2．通過免疫組化SP法檢測(cè)hK6蛋白在19例良性卵

4、巢上皮瘤、11例交界性卵巢上皮瘤和45例卵巢上皮癌中的表達(dá)，以及該蛋白的表達(dá)與患者年齡、原發(fā)腫瘤大小、組織分型、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征和病人術(shù)后牛存狀況的關(guān)系，探討其臨床意義。 結(jié)果:1.不同濃度(1×10<'10>、1×10<'9>、1×10<'8>、1×10<'7>mol/L)的17 β-E<,2>作用72小時(shí)后，H08910細(xì)胞KLK6 mRNA水平(3.83±0.41、4.14±0.49、6.26±

5、0.38、7.28±1.82)和蛋白水平(10.62±0.35、10.89±0.12、11.88±0.28、12.07±0.15)均明顯高于乙醇對(duì)照組(P(0.01)；隨著E<,2>濃度增加，各試驗(yàn)組H08910細(xì)胞G<,0>/G<,1>期百分率(67.72﹪、66.98﹪、66.31﹪、65.19﹪)呈下降趨勢(shì)，S期(17.70﹪4、18.27﹪、18.55﹪、19.11﹪)和G2/M期百分率(14.58﹪、14.75﹪、15.14﹪

6、、15.70﹪)呈上升趨勢(shì)；同時(shí)，各試驗(yàn)組H08910細(xì)胞光吸收度A值(0.7713±0.0151、0.8487±0.0224、0.8577±0.0163、0.8953±0.0310)也逐漸升高，與乙醇對(duì)照組(0.4593±0.0638)相比，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(0.01)。 2.hK6蛋白在卵巢良性、交界性及惡性卵巢腫瘤組織中的陽性表達(dá)率分別為15.8﹪，27.3﹪和60.0﹪，其在卵巢癌中的陽性表達(dá)率明顯高于其在良性和

7、交界性腫瘤中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。hK6的陽性表達(dá)與患者的年齡、原發(fā)灶大小以及卵巢癌組織學(xué)類型無關(guān)；中低分化卵巢癌中的陽性表達(dá)率(68.4﹪)高于高分化者(14.3﹪)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023<0.05)；卵巢癌晚期(Ⅲ期)的陽性表達(dá)率(76.7﹪)明顯高于早期(Ⅰ/Ⅱ期)陽性表達(dá)率(26.7﹪，P=0.001<0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性表達(dá)率(77.8﹪)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(33.3﹪，P=0.

8、003<0.01)；術(shù)后3年內(nèi)復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移/死亡的陽性表達(dá)率(75.0﹪)高于術(shù)后3年內(nèi)病情穩(wěn)定者(42.9﹪，p=0.028<0.05)。 結(jié)論：KLK6基因在卵巢癌細(xì)胞株中的表達(dá)受雌激素上調(diào)，同時(shí)促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖，可能是卵巢癌發(fā)展的促進(jìn)因子，為卵巢癌防治提供了新的思路。該基因編碼的蛋白hK6在卵巢癌組織中的表達(dá)明顯高于其在良性和交界性卵巢腫瘤中的表達(dá)，且其在晚期、分化差、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后差的卵巢癌中高表達(dá)，提示可能是一種