ELISA法檢測(cè)HCV抗體最佳Cut-off的確定及四種試劑比較.pdf

1、目的：研究ELISA法檢測(cè)丙型肝炎病毒(HCV)抗體診斷陽(yáng)性的最佳Cut-off值及比較國(guó)內(nèi)常用四種試劑的敏感性和特異性。
　　方法：
　　1.高、低濃度的質(zhì)控品，平行檢測(cè)20次，計(jì)算批內(nèi)精密度變異系數(shù)（CV），并高、低濃度的質(zhì)控品，每天檢測(cè)復(fù)孔，連續(xù)檢測(cè)20天，計(jì)算批間精密度CV。
　　2.選取2013年11月至2014年4月來(lái)我院住院患者或體檢者血清或血漿經(jīng)ELISA法初篩HCV抗體陽(yáng)性的標(biāo)本130例和接近臨界值(

2、陰性)標(biāo)本45例(OD=0.15-2)。利用重組免疫印跡法(RIBA/PCR)確認(rèn)所有標(biāo)本的陰性或陽(yáng)性。
　　3.判斷在試劑盒提供的Cut-off值的條件下，ELISA法與RIBA法檢測(cè)結(jié)果的一致性的Kappa值及ELISA法檢測(cè)HCV抗體的敏感性和特異性。
　　4.利用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件繪制ROC曲線，選取最大的切點(diǎn)為臨界點(diǎn)，并計(jì)算新的Cut-off值時(shí)，ELISA法檢測(cè)結(jié)果與RIBA法結(jié)果的一致性Kappa值及EL

3、ISA法檢測(cè)HCV抗體的敏感性和特異性。
　　5.選取實(shí)驗(yàn)室常用的四種試劑無(wú)序的編為A、B、C、D，在四種試劑檢測(cè)前評(píng)估評(píng)價(jià)批內(nèi)精密度CV和批間精密度CV，滿足實(shí)驗(yàn)室要求后，四種試劑分別檢測(cè)經(jīng)RIBA法確認(rèn)后的參考血清，計(jì)算A、B、C、D試劑的敏感性和特異性，并比較四種試劑檢測(cè)敏感性和特異性有無(wú)差異。
　　結(jié)果：
　　1.高、低濃度的質(zhì)控品批內(nèi)精密度分別為9.58％和10.08%，批間精密度分別為12.08%和13.7

4、8%。
　　2.兩種檢測(cè)結(jié)果的一致性 Kappa值為0.676，ELISA法檢測(cè)的敏感性為98.17%,特異性為65.16%,此時(shí)，兩種檢測(cè)方法有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　3.利用ROC曲線確定的CO的臨界值Cut-off值為0.252,此時(shí)，兩種檢測(cè)方法結(jié)果的一致性Kappa值為0.829。ELISA法檢測(cè)的敏感性為94.50%,特異性為89.39%,此時(shí)，兩種檢測(cè)方法無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　4.

5、利用ROC曲線確定S/CO的臨界值是2.44，此時(shí)的敏感性為93.6%，特異性為96.1%。
　　5.四種試劑檢測(cè)前，評(píng)估的批內(nèi)精密度CV為9.82%,批間精密度CV為13.17%。
　　6. A試劑的敏感性為99.08%,特異性為72.73%。B試劑的敏感性為99.08%,特異性為75.76%。C試劑的敏感性為99.08%,特異性為72.73%。D試劑的敏感性為99.08%,特異性為74.24%。且四種試劑間的敏感性、特異

6、性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.試劑說(shuō)明書(shū)提供的Cut-off值可能與實(shí)驗(yàn)室實(shí)際Cut-off值存在差異。
　　2.通過(guò)ROC曲線確定合適的Cut-off值，能有效的降低標(biāo)本檢測(cè)的假陽(yáng)性率,能夠?yàn)榕R床提供可靠的結(jié)果。
　　3.國(guó)產(chǎn)試劑通常有較高的敏感性，不同的試劑間檢測(cè)的敏感性和特異性不同。
　　4.建議不同的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)所用的試劑，建立適合的Cut-off值，以減少標(biāo)本的漏診和誤診。