新城疫間接ELISA抗體檢測試劑盒的研究.pdf

1、利用新城疫弱毒Clone30株病毒抗原,通過間接ELISA方法對試劑盒的各項反應(yīng)條件進行系列的摸索試驗后,成功地組裝了檢測試劑盒.對ELISA各項反應(yīng)條件進行摸索,并確定了最適工作條件,研究結(jié)果表明,新城疫病毒抗原最佳包被濃度為1.086ug/ml,最適包被條件為4℃過夜,被檢血清最佳稀釋度為1:100,酶標(biāo)結(jié)合物最佳工作濃度1:800.待檢血清和酶標(biāo)二抗的反應(yīng)時間均為37℃ 30分鐘,底物的反應(yīng)時間為37℃ 15分鐘.采用已確立的EL

2、ISA反應(yīng)條件,檢測14份經(jīng)西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒檢測為陰性的血清,依據(jù)陰陽性臨界值=陰性血清OD平均值+3SD,確定陰陽性臨界值為0.34.用Lasota株全病毒進行阻斷試驗結(jié)果表明,Lasota株病毒能夠阻斷陽性血清與包被的Clone30株病毒的結(jié)合反應(yīng).用此方法檢測E.coli的O<,1>、O<,2>、O<,78>,AI H<,9>,EDS<,76>,IBD的單因子雞血清,均為陰性,無交叉反應(yīng),說明建立的ELI

3、SA具有很好的特異性.用已建立的ELISA和西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒同時對64份血清樣本進行檢測,檢測結(jié)果表明,建立的ELISA方法的特異性和敏感性分別為90﹪和93.2﹪.同時,用已建立的ELISA方法與HI方法對80份血清樣本進行檢測,結(jié)果表明ELISA的效價對數(shù)與HI效價對數(shù)呈線性回歸關(guān)系,二者的相關(guān)系數(shù)(r)為0.91.試劑盒的保存期試驗結(jié)果表明,試劑盒可以保存到三個月.該研究建立了一種經(jīng)濟、快速、準(zhǔn)確的檢測方