骨髓間質(zhì)細(xì)胞對(duì)肺癌骨轉(zhuǎn)移作用的基礎(chǔ)研究和食管癌術(shù)后輔助化療的臨床研究.pdf

1、第一部分骨間質(zhì)細(xì)胞對(duì)不同骨轉(zhuǎn)移潛能肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響 背景和目的：約20-40％的常見(jiàn)腫瘤患者的骨髓中可檢測(cè)到播散的腫瘤細(xì)胞，但肺癌、乳腺癌等細(xì)胞易在骨中“定居”，直至變成臨床可見(jiàn)的骨轉(zhuǎn)移，而其他常見(jiàn)腫瘤如胃癌腸癌等，骨轉(zhuǎn)移很少見(jiàn)。因此骨間質(zhì)環(huán)境可能在骨轉(zhuǎn)移中扮演一定作用，我們研究骨間質(zhì)細(xì)胞對(duì)不同骨轉(zhuǎn)移潛能肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，探討其在肺癌骨轉(zhuǎn)移中的作用。 方法：分別利用骨間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液(BSC)、骨髓血的上清

2、液(BM)和常規(guī)培養(yǎng)液(RM)處理具有不同骨轉(zhuǎn)移潛能的肺癌細(xì)胞株H460、A549和SPC-A1。采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期變化及細(xì)胞凋亡率。ELISA的方法比較BSC，BM和RM間文獻(xiàn)報(bào)道與骨轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的濃度差別。 結(jié)果：BSC和BM能明顯增強(qiáng)骨高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株H460的增殖(BM和BSC，與RM相比，P＜0.05)，而對(duì)骨低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株A549和SPC-A1影響不大(BM和BSC，與R

3、M相比，P＞0.05)。人骨髓血的上清液對(duì)很少發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的舌癌細(xì)胞T8113生長(zhǎng)無(wú)明顯影響，對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901甚至有增殖抑制作用。雙磷酸鹽Zometa(20UM)能阻斷骨髓血上清液對(duì)肺癌細(xì)胞H460的促增殖作用，而P13K特異性的抑制劑Wortmannin(200nM)無(wú)明顯抑制作用。H460細(xì)胞經(jīng)BSC和BM處理24小時(shí)后，早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡/繼發(fā)性壞死細(xì)胞的百分比均比RM組明顯降低(P＜0.01)，而細(xì)胞周期無(wú)明顯差別。

4、ELISA的方法發(fā)現(xiàn)TGF-b，HGF，IGF-1，IL-6和PDGF在BSC，BM，RM組間無(wú)明顯差別。 結(jié)論：骨間質(zhì)細(xì)胞的分泌液能促進(jìn)骨高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株H460的增殖，其機(jī)制是通過(guò)減少細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)。盡管ELISA的方法未發(fā)現(xiàn)含量特別高的跟腫瘤骨轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子，但使用更加靈敏和高通量的研究方法，如雙向凝膠電泳聯(lián)合質(zhì)譜，篩選骨間質(zhì)細(xì)胞分泌液中促進(jìn)骨轉(zhuǎn)移的因子。值得進(jìn)一步研究。 第二部分使用高通量的技術(shù)平臺(tái)研究肺癌細(xì)胞與骨基質(zhì)

5、的粘附作用 背景和目的：20％左右的肺癌患者能發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，其產(chǎn)生的頑固性疼痛，病理性骨折及脊髓壓迫產(chǎn)生的癱瘓是臨床上的瓶頸問(wèn)題。肺癌患者中，有的在腫塊很小的時(shí)期就發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，而有的則一直不發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，說(shuō)明不同類型腫瘤在親骨、定位生長(zhǎng)和與骨基質(zhì)粘附方面有明顯差異，而越來(lái)越多的證據(jù)顯示，粘附及細(xì)胞粘附分子在腫瘤骨轉(zhuǎn)移中起重要作用。 材料和方法：通過(guò)粘附實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)骨高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株H460在骨間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)(HBS)液包被的器皿上的

6、黏附能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于常規(guī)培養(yǎng)液，繼而我們使用基因芯片高通量的技術(shù)平臺(tái)研究H460細(xì)胞與骨間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液粘附后是否能調(diào)節(jié)下游基因的改變。 結(jié)果：Microarray證實(shí)，細(xì)胞株H460在骨間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)(HBS)液包被的器皿上的黏附2小時(shí)和24小時(shí)后，integrinb3，ADAMTS1等31個(gè)基因的表達(dá)持續(xù)上調(diào)。這些基因功能集中在細(xì)胞一細(xì)胞外基質(zhì)黏附和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑兩大類。Real-timePCR證實(shí)了基因芯片數(shù)據(jù)的可靠性。 結(jié)

7、論：我們的研究提示，骨高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株H460與骨間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液的黏附作用能激活某些下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和改變黏附相關(guān)分子的表達(dá)，這可能是其易于在骨中生存，進(jìn)而產(chǎn)生骨轉(zhuǎn)移的原因。 第三部分食管癌術(shù)后輔助化療的薈萃分析和來(lái)自復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院的配對(duì)研究 背景和目的：目前關(guān)于食管癌的輔助化療的前瞻性隨機(jī)臨床試驗(yàn)很少，哪個(gè)亞組的患者可以最大程度的獲益也不清楚。本研究的目的是通過(guò)薈萃分析，并結(jié)合復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院的資料，明確食管癌

8、術(shù)后輔助化療的價(jià)值。 方法：薈萃分析使用Comprehensivemetar-analysis軟件。配對(duì)研究包括1998-2004年在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院接受治療的食管癌患者，其中90名患者接受輔助化療，180名患者未接受化療。采用免疫組化的方法檢測(cè)了9個(gè)標(biāo)記物分析預(yù)后和預(yù)測(cè)化療價(jià)值。 結(jié)果：共有6項(xiàng)研究，1037例患者納入本薈萃分析，接受輔助化療與無(wú)化療組治療效果無(wú)顯著性差異，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的亞組患者中，輔助化療顯

9、示了提高生存率的趨勢(shì)。來(lái)自復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院的研究中，對(duì)照組和化療組的Ⅰ期患者(P=0.59&P=0.59)、Ⅱ期患者(P=0.2778&P=0.2778)及Ⅲ期患者(P=0.695&P=0.8667)無(wú)病生存率和總生存率無(wú)顯著性差異?；煂?duì)腫瘤轉(zhuǎn)移至喉返神經(jīng)和(或)腹腔淋巴結(jié)的患者(Ⅳa亞組)最有效。無(wú)病生存率和總生存率明顯優(yōu)于未接受化療的患者(P=0.038，0.01)。Bcl-2表達(dá)提示預(yù)后不良，其在化療組中的表達(dá)較無(wú)化療組更有