葉酸對(duì)局灶型腦梗塞大鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化作用的研究.pdf

1、目的： 研究葉酸對(duì)局灶性腦梗塞大鼠神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells，NSCs)增殖、分化、凋亡作用的影響及加入U(xiǎn)0126作用下葉酸對(duì)NSCs增殖、分化作用的影響，并探討其機(jī)制，為研究葉酸防治腦梗塞疾病提供科學(xué)依據(jù)。 方法： 用SD成年雄性大鼠，正常條件下分組為：①假手術(shù)組(SO)，灌胃生理鹽水10 ml/kg bw·d；②腦梗塞組(MCAO)，灌胃生理鹽水10 ml/kg bw·d；③梗塞+低劑量葉

2、酸組(MCAO+LFA)，灌胃葉酸4 mg/kg bw·d；④梗塞+高劑量葉酸組(MCAO+LFA)，灌胃葉酸12 mg/kg bw·d；U0126條件下分組為：①DMSO對(duì)照組(DMSO)；②U0126組(U0126)；③梗塞+高劑量葉酸組(high folic acid，MCAO+HFA)；④U0126+梗塞高劑量葉酸組(U0126+high folic acid，U0126+MCAO+HFA)。U0126組和U0126+MCAO+

3、HFA鼠尾靜脈注射U0126(0.5mg/kg)。除SO組外，其他組采用線拴法制作大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型(middle cerebral artery occlusion，MCAO)，補(bǔ)充葉酸前、補(bǔ)充28 d后及造模后7d，采用化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定各組大鼠血清葉酸含量；進(jìn)行腦組織光鏡病理觀察；利用免疫熒光雙標(biāo)記及Western Blot方法分別測(cè)定3，7及14 d時(shí)間點(diǎn)葉酸對(duì)各組MCAO大鼠NSCs增殖及分化為星型膠質(zhì)細(xì)胞(astrocy

4、te，Ast)和神經(jīng)元的影響。TUNEL法測(cè)定各組梗塞側(cè)腦皮質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。 結(jié)果： 灌胃前各組大鼠血清葉酸濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；灌胃及造模后，MCAO+LFA組和MCAO+HFA組血清葉酸水平均高于SO組和MCAO組(P<0.05)，MCAO+HFA組血清葉酸水平高于MCAO+LFA組(P<0.05)各組干預(yù)前后比較，葉酸干預(yù)組血清葉酸水平均高于補(bǔ)充前。腦組織病理學(xué)檢查顯示MCAO組腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞體

5、積縮小，染色加深，胞漿及胞核固縮，與MCAO組相比，MCAO+LFA組神經(jīng)細(xì)胞固縮減輕，MCAO+HFA組腦組織病變改善明顯，形態(tài)接近SO組。正常條件下葉酸干預(yù)組NSCs的增殖水平及分化為Asts和神經(jīng)元水平高于MCAO組及SO組(P<0.05)，且MCAO+HFA組高于MCAO+LFA組：U0126條件下，U0126+MCAO+HFA組NSCs增殖及分化程度低于MCAO+HFA組(P<0.05)：MCAO+HFA組與DMSO組的比較U

6、0126+MCAO+HFA組與U0126比較，組間差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；U0126組NSCs增殖及分化程度低于DMSO組(P<0.05)。TUNEL凋亡結(jié)果顯示：MCAO組和葉酸干預(yù)組細(xì)胞凋亡率均明顯高于SO組(P<0.05)，葉酸干預(yù)組細(xì)胞凋亡率均明顯低于MCAO組(P<0.05)，MCAO+HFA組細(xì)胞凋亡率低于MCAO+LFA組(P<0.05)。 結(jié)論： 通過(guò)灌胃途徑補(bǔ)充葉酸可以顯著提高大鼠血清葉酸水