初情期山羊生殖內(nèi)分泌的變化及垂體miRNA的篩選.pdf

1、初情期是動(dòng)物獲得繁殖能力的一個(gè)重要過(guò)渡時(shí)期，也是動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的一個(gè)重要階段，其出現(xiàn)的早與遲直接影響動(dòng)物繁殖能力和生長(zhǎng)發(fā)育，進(jìn)而影響?zhàn)B殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。研究表明，調(diào)控初情期的機(jī)制還不完全清楚，主要有遺傳因素、環(huán)境因素和內(nèi)分泌因素，以及它們間的相互作用，其中遺傳因素和內(nèi)分泌因素是影響動(dòng)物初情期的基礎(chǔ)。本文以安淮山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，研究其初情期發(fā)育進(jìn)程中生殖激素的變化規(guī)律及垂體中與初情期相關(guān)的microRNAs(miRNA)基因，為進(jìn)一步研究

2、山羊初情期啟動(dòng)的機(jī)制提供科學(xué)的理論依據(jù)。
　　分別采取初情期前和初情期山羊的血液、垂體和卵巢，采用酶聯(lián)免疫分析法(enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血清中促黃體激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)和孕激素(P4)水平;將卵巢組織進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、蘇木素-伊紅(Haematoxylin-Eosin，HE)染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照;利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)初情期前和初情期山

3、羊垂體測(cè)序，篩選與初情期相關(guān)的miRNA，并利用GO(Gene Ontogy)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genoms)分析靶基因所在的信號(hào)通路和參與的生物學(xué)功能，試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)卵巢組織學(xué)結(jié)構(gòu)顯示，初情期前和初情期的卵巢都具有原始卵泡、初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡;發(fā)現(xiàn)初情期卵巢有較大的生長(zhǎng)卵泡。
　　(2)血清中LH、FSH兩種激素變化規(guī)律一致，均在2.25M與5M達(dá)到峰值

4、，E2在2.75M和5M達(dá)到峰值，均顯著高于相近月齡(P＜0.05);P4在5.25M達(dá)到峰值，顯著高于其它月齡（P＜0.05）。
　　(3)在初情期前和初情期山羊垂體共篩選出差異表達(dá)miRNA476個(gè);其中有446個(gè)miRNA在兩個(gè)時(shí)期都參與了表達(dá)，但有17個(gè)miRNA只在初情期時(shí)特異表達(dá)，13個(gè)miRNA只在初情期前特異表達(dá)。
　　(4)初情期與初情期前表達(dá)極顯著差異的miRNA共篩選出4個(gè)，其中在初情期表達(dá)上調(diào)的miR

5、NA3個(gè)，下調(diào)的miRNA1個(gè)。
　　(5)G0富集分析發(fā)現(xiàn)miRNA靶基因參與了cell（細(xì)胞）、cell part（細(xì)胞組分）和binding（結(jié)合）等多種生物學(xué)過(guò)程;KEGG相關(guān)通路分析表明miRNA靶基因主要富集在催產(chǎn)素信號(hào)通路(Oxytocin signaling pathway)、促性腺激素釋放激素信號(hào)通路（GnRH signaling pathway）、雌激素信號(hào)通路(Estrogen signaling pathw

6、ay)、cAMP信號(hào)通路（cAMP signaling pathway）等與初情期相關(guān)的通路。
　　結(jié)論:(1)安淮山羊的初情期時(shí)間為5M左右。(2)山羊LH、FSH、E2和P4的濃度具有一定的分泌規(guī)律，即在1.5～2.25M和4.75～5M顯著增加，但P4濃度僅在5～5.25M增加。(3)初情期前和初情期山羊垂體存在476個(gè)差異表達(dá)的miRNA，其中4個(gè)miRNA極顯著差異。(4)GO和KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)miRNA靶基因參與了