7-二氟甲氧基-5，4’-二-正辛烷氧基異黃酮對(duì)SGC-7901胃癌干樣細(xì)胞EMT和侵襲的影響.pdf

1、目的:研究7-二氟甲氧基-5，4'-二-正辛烷氧基異黃酮(7-difluoromhoxyl-5，4'-di-n-octylgenistein， DFOG)抑制人胃癌SGC-7901細(xì)胞系干樣細(xì)胞(gastric cancer stem-like cells，GCSLCs)特性和逆轉(zhuǎn)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)作用及其機(jī)制。
　　方法:采用國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)書(shū)(國(guó)家發(fā)明

2、專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)枮?01210591131.2)中的方法合成DFOG，并行1H和13C核磁共振確證化學(xué)結(jié)構(gòu)。體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細(xì)胞系細(xì)胞。應(yīng)用干細(xì)胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)法富集和擴(kuò)增球形成細(xì)胞(sphere forming cells，SFCs)。與親本細(xì)胞對(duì)照，應(yīng)用腫瘤球形成試驗(yàn)、劃痕法、Transwell侵襲試驗(yàn)和western blot分別檢測(cè)球形成率、細(xì)胞遷移率、細(xì)胞侵襲率和CD133、CD44和ALDH1蛋白表達(dá)水平，鑒別S

3、FCs是否具有GCSLCs特性以及測(cè)定不同濃度DFOG(1.0、3.0、10.0μmol/mL)對(duì)GCSLCs特性的影響。Western blot分析上皮細(xì)胞標(biāo)志物(E-cadherin)和間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(N-cadherin)蛋白表達(dá)評(píng)估EMT表型和DFOG逆轉(zhuǎn)EMT表型作用。對(duì)比分析GCSLCs和親本細(xì)胞致癌性轉(zhuǎn)錄因子Foxm1和EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Twist1蛋白表達(dá)狀態(tài)，通過(guò)檢測(cè)DFOG、FoxM1 siRNA轉(zhuǎn)染及兩者聯(lián)合處理

4、對(duì)FoxM1和Twist1蛋白表達(dá)以及GCSLCs特性和EMT表型的影響，探討DFOG作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.利用專(zhuān)利申請(qǐng)書(shū)中的方法合成并得到DFOG500.0 mg，并利用核磁共振確證其化學(xué)結(jié)構(gòu);
　　2.人胃癌SGC-7901細(xì)胞系SFCs較親本細(xì)胞具有更高球形成率(P＜0.05)、更強(qiáng)細(xì)胞遷移和侵襲能力(P＜0.05）和更高CD133、CD44和ALDH1蛋白表達(dá)水平(P＜0.05）。
　　3.與親

5、本細(xì)胞相比，SFCs N-cadherin表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）、E-cadherin蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）。
　　4.DFOG(1.0、3.0、10.0μmol/mL)以劑量依賴(lài)方式抑制GCSLCs球形成(P＜0.05）、體外遷移和侵襲能力（P＜0.05），并下調(diào)CD133、CD44和ALDH1蛋白表達(dá)（P＜0.05）。
　　5.DFOG(1.0、3.0、10.0μmol/mL)降低GCSLCs N-cadheri

6、n蛋白表達(dá)水平(P＜0.05），并上調(diào)E-cadherin蛋白表達(dá)(P＜0.05）。
　　6.與親本細(xì)胞相比，GCSLCs高表達(dá)FoxM1蛋白和Twist1蛋白(P＜0.05)。
　　7.DFOG(1.0、3.0、10.0μmol/mL)抑制GCSLCs FoxM1蛋白和Twist1蛋白表達(dá)(P＜0.05）。
　　8.FoxM1 siRNA轉(zhuǎn)染與DFOG協(xié)作降低GCSLCs FoxM1和Twist1蛋白表達(dá)水平(P＜0

7、.05）。
　　9.FoxM1 siRNA增強(qiáng)DFOG抑制GCSLCs球形成能力(P＜0.05）、遷移和侵襲能力(P＜0.05）、降低CD133、CD44和ALDH1蛋白表達(dá)水平(P＜0.05)和調(diào)節(jié)N-cadherin和E-cadherin蛋白表達(dá)作用(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.使用專(zhuān)利申請(qǐng)書(shū)方法得到了DFOG，并確證其化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　2.人胃癌SGC-7901細(xì)胞系SFCs具有GCSLCs特性和E