BMP-2和HGF基因修飾的自體MSCs促進(jìn)腱骨愈合的研究.pdf

1、目的：探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）和肝細(xì)胞生長因子（HGF）基因修飾的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合的促進(jìn)作用。
　　方法：①于兔雙側(cè)髂嵴處抽取骨髓血，分離和培養(yǎng)兔骨髓MSCs,并對獲取的細(xì)胞進(jìn)行鑒定；以攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）基因的重組腺病毒和攜帶肝細(xì)胞生長因子（HGF）基因的重組腺病毒修飾兔骨髓MSCs,檢測轉(zhuǎn)染效率和目的蛋白的表達(dá)水平，并觀察基因修飾對MSCs表面標(biāo)志物、分化能力及增殖能力

2、的影響。②將80只成年新西蘭大白兔，隨機(jī)分為對照組、MSCs組、MSCs-HGF組和MSCs-BMP2組，顯露并切斷兔正常前交叉韌帶，切取自體趾長伸肌腱重建前交叉韌帶，對照組在每側(cè)脛骨的腱骨界面植入100ul纖維蛋白膠，MSCs組注射5×106MSCs+100ul纖維蛋白膠，MSCs-HGF組在界面植入5×106MSCs-HGF+100ul纖維蛋白膠，MSCs-BMP2組在界面植入5×106MSCs-BMP2+100ul纖維蛋白膠。分別

3、在術(shù)后4、8、12周取材進(jìn)行組織學(xué)研究，術(shù)后12周取材進(jìn)行生物力學(xué)研究，分析評估腱－骨界面的愈合情況。
　　結(jié)果：①兔骨髓MSCs分離培養(yǎng)后細(xì)胞均一性好、成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，具有很強(qiáng)的增殖能力，表面特異性抗原CD29、CD44、CD73表達(dá)陽性，而CD31、CD45為陰性表達(dá)，誘導(dǎo)分化實驗顯示兔骨髓MSCs具有向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化的能力。②腺病毒成功轉(zhuǎn)染兔骨髓MSCs，MOI=150pfu/細(xì)胞是較理想的轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)，基因轉(zhuǎn)染后目的

4、基因持續(xù)表達(dá)，48小時表達(dá)量最高；目的基因轉(zhuǎn)染不影響細(xì)胞增殖和分化能力、不改變表面標(biāo)志物。③MSCs-BMP2組術(shù)后4周和8周在腱骨界面之間出現(xiàn)軟骨細(xì)胞，術(shù)后12周腱骨界面呈現(xiàn)肌腱、纖維軟骨、礦化軟骨向骨逐漸過渡；MSCs-HGF組術(shù)后4周在腱骨界面出現(xiàn)較多新生血管，術(shù)后8周血管逐漸減少，術(shù)后12周腱骨結(jié)合緊密，腱骨界面可見較多排列有序的膠原纖維。生物力學(xué)研究顯示MSCs-BMP2組最大載荷和抗拉剛度均顯著大于其他實驗分組（P<0.05