高通量連續(xù)性血液濾過技術(shù)對膿毒血癥患者外周血單個(gè)核細(xì)胞miRNA-146a的影響.pdf

1、目的:前瞻性觀察高通量連續(xù)性血液濾過治療(HVHF)對嚴(yán)重膿毒性癥患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中miRNA-146a表達(dá)的影響，并探討HVHF治療對膿毒癥發(fā)揮作用可能的機(jī)制。
　　 方法:將2011年3月至2012年9月入住該院重癥醫(yī)學(xué)科，符合納入標(biāo)準(zhǔn)的在接受常規(guī)治療同時(shí)接受HVHF治療的嚴(yán)重膿毒癥患者15例，設(shè)為HVHF組，另選15例患者與HVHF組配對的性別相同，年齡和APACHEⅡ評分相近，符合納入標(biāo)準(zhǔn)的但因某些原因未能行HVHF

2、治療而其余治療措施相同的嚴(yán)重膿毒癥患者作為對照組。常規(guī)治療指原發(fā)病的治療、抗生素、血管活性藥物、營養(yǎng)對癥支持治療、維持水電解質(zhì)酸堿平衡及機(jī)械通氣等治療;HVHF治療指在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合高通量血液濾過(HVHF)治療，置換量設(shè)為4L/h;
　　 1.在兩組治療過程的0h，6h，12h，24 h，48 h時(shí)相點(diǎn)，抽取患者外周靜脈血，用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，用RNA提取試劑盒(miRNeasy MiniKit)提取總

3、RNA，熒光定量PCR法檢測miRNA-146a表達(dá)量的變化。
　　 2.兩組患者入科接受治療24 h后分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞并于體外培養(yǎng)，以脂多糖(LPS)刺激，分別在4h、8h、12h、24 h、48 h時(shí)相點(diǎn)收集單個(gè)核細(xì)胞并檢測單個(gè)核細(xì)胞中miRNA-146a表達(dá)量的變化;同時(shí)以ELISA法檢測單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-a，IL-6，IL-10水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、兩組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的miR

4、NA-146a表達(dá)水平變化:兩組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞miRNA-146a表達(dá)量較治療前均有所下調(diào)，但HVHF組較對照組下調(diào)更顯著;
　　 2、兩組患者體外培養(yǎng)的單個(gè)核細(xì)胞分泌功能變化:HVHF組體外孵育的外周血單個(gè)核細(xì)胞在LPS刺激下于各個(gè)時(shí)相點(diǎn)培養(yǎng)液中TNF-a、IL-6的分泌水平均明顯高于對照組;HVHF組TNF-a、IL-6分泌量在12h達(dá)最高值，而對照組在8h即達(dá)最高值;兩組細(xì)胞IL-10分泌水平均持續(xù)升高，兩組間各時(shí)相

5、點(diǎn)IL-10分泌水平無明顯差異;
　　 3、兩組患者體外培養(yǎng)的單個(gè)核細(xì)胞miRNA-146a表達(dá)變化:HVHF組體外孵育的外周血單個(gè)核細(xì)胞在LPS刺激下miRNA-146a表達(dá)量較孵育前有所升高，在12h時(shí)相升高明顯，對照組在孵育前及孵育4、8h時(shí)相點(diǎn)miRNA-146a表達(dá)都處于高水平狀態(tài)，明顯高于同時(shí)相的HVHF組。
　　 結(jié)論:高通量連續(xù)性血液濾過治療(HVHF)通過大量清除膿毒癥患者血循環(huán)中的炎癥因子及促炎介質(zhì)及