MicroRNA-430靶向調(diào)控CXCR7對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　膀胱癌是人類常見(jiàn)的惡性腫瘤，然而其增殖和侵襲的分子機(jī)制依舊不明。
　　MicroRNAs（miRNAs）是一類微小的內(nèi)源性非編碼的RNA，通過(guò)與靶位點(diǎn)mRNA的3'端非翻譯區(qū)UTR相互作用來(lái)抑制基因的表達(dá)。新近的數(shù)據(jù)表明，miRNAs在各種生物過(guò)程，包括人類癌癥的發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。mirna-430的研究主要是在斑馬魚上進(jìn)行研究，miR-430已被證明與斑馬魚的早期胚胎發(fā)育有重要關(guān)系。然而

2、，mir-430在涉及人類惡性腫瘤的調(diào)控上暫時(shí)沒(méi)有報(bào)道。CXCR7是趨化因子SDF-1α即CXCL12的受體，其是一種具有7次跨膜的基質(zhì)蛋白。CXCR7的高表達(dá)被很多研究報(bào)道在腫瘤的發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移中有增強(qiáng)作用，建議CXCR7作為癌癥治療中一個(gè)有吸引力的目標(biāo)。Yates等發(fā)現(xiàn)CXCR7的表達(dá)在膀胱癌組織中增高，并且其增高的水平伴隨著高級(jí)別的腫瘤及腫瘤轉(zhuǎn)移。此外，CXCR7已被證實(shí)通過(guò)多種途徑與膀胱癌的增殖、遷移、侵襲有關(guān)，其中包括ERK

3、，Stat3與AKT等信號(hào)通路。本研究目的為驗(yàn)證miR-430靶向作用于CXCR7，并進(jìn)一步闡述這種靶向作用對(duì)膀胱癌細(xì)胞的影響及對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步的研究。
　　方法:
　　1、采用Real-time PCR檢測(cè)miR-430在正常膀胱組織、癌旁組織及不同分期的膀胱癌組織中的表達(dá)情況。采用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-430與CXCR7之間的靶向調(diào)控關(guān)系。
　　2、構(gòu)建miR-430過(guò)表達(dá)慢病毒載體和CXCR7過(guò)表達(dá)真

4、核質(zhì)粒載體。
　　3、采用MTT法、流式細(xì)胞檢測(cè)法、TransWell法等常用方法對(duì)miR-430過(guò)表達(dá)慢病毒感染和CXCR7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的人膀胱癌5637細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期、侵襲能力、克隆形成的方面來(lái)檢測(cè)miR-430靶向調(diào)控CXCR7對(duì)膀胱癌生物學(xué)行為的影響。
　　4、用Western-Blot方法來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)染了miR-430過(guò)表達(dá)慢病毒和CXCR7過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的膀胱癌5637細(xì)胞中ERK、p-ERK、MM

5、P-2、MMP-9的表達(dá)情況，來(lái)初步探尋其對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)影響的機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1、miR-430在膀胱癌組織中表達(dá)較正常組織組和癌旁組織組降低，且在膀胱癌組織中隨病理分期的增加而降低明顯。通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)驗(yàn)證了miR-430與CXCR7之間存在靶向調(diào)控關(guān)系，miR-430能夠降低CXCR7在膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)。
　　2.成功建立了miR-430過(guò)表達(dá)慢病毒載體及CXCR7過(guò)表達(dá)真核質(zhì)粒載體。

6、>　　3、在人膀胱癌5637細(xì)胞株中使mir-430的強(qiáng)制過(guò)表達(dá)明顯抑制細(xì)胞增殖，遷移侵襲和克隆形成的能力，與CXCR7強(qiáng)制過(guò)表達(dá)的結(jié)果截然相反。
　　4.在人膀胱癌5637細(xì)胞株中miR-430的過(guò)表達(dá)能抑制ERK、p-ERK、MMP-2、MMP-9的表達(dá)，而上調(diào)TFAM表達(dá)卻促進(jìn)ERK、p-ERK、MMP-2、MMP-9的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　本研究首先發(fā)現(xiàn)在正常膀胱、癌旁組織和膀胱癌組織中的mir-430的異常

7、表達(dá)。此外，在人膀胱癌5637細(xì)胞株中使mir-430的強(qiáng)制過(guò)表達(dá)明顯抑制細(xì)胞增殖，遷移侵襲和克隆形成的效率，與CXCR7強(qiáng)制過(guò)表達(dá)的結(jié)果截然相反，而CXCR7在本研究中已經(jīng)被驗(yàn)證是miR-430的直接靶向目標(biāo)。我們進(jìn)一步的研究表明，在膀胱癌5637細(xì)胞株中過(guò)表達(dá)miR-430后與細(xì)胞增殖和遷移相關(guān)的基因包括ERK，p-ERK，MMP2和MMP9均明顯下調(diào)，而在過(guò)表達(dá)CXCR7的膀胱癌5637細(xì)胞株中這些基因的表達(dá)顯著上調(diào)。我們的研究首