膀胱腫瘤患者外周血樹(shù)突狀細(xì)胞免疫功能與PD-L1通路關(guān)系的研究.pdf

1、在我國(guó),膀胱腫瘤作為泌尿系統(tǒng)發(fā)病率最高的腫瘤,術(shù)后復(fù)發(fā)率高是其特點(diǎn)之一。研究表明,膀胱腫瘤復(fù)發(fā)機(jī)制可能與腫瘤細(xì)胞不易被外周T細(xì)胞識(shí)別,在微環(huán)境中過(guò)量分泌負(fù)性細(xì)胞因子,且患者自身免疫監(jiān)視能力下降,最終發(fā)生免疫逃逸有關(guān)。以目前手術(shù)為主,膀胱灌注化療為輔的治療方案,并不能完全防止膀胱腫瘤的復(fù)發(fā)和進(jìn)展。
　　樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcells,DCs)是目前已知的人體內(nèi)抗原遞呈能力最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞(antigenpresent

2、ingcell,APC),能有效活化初始T細(xì)胞,在啟動(dòng)免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵性作用;圍繞如何修飾DCs抗原遞呈能力,優(yōu)化腫瘤患者DCs免疫功能的研究已成為腫瘤免疫治療的熱點(diǎn)之一。程序性死亡配體1(Programmeddeathligand1,PD-L1)是腫瘤細(xì)胞過(guò)表達(dá)的負(fù)性共刺激分子,能與程序性死亡分子(PD-1)結(jié)合成PD-L1/PD-1,負(fù)向調(diào)節(jié)T細(xì)胞受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞因子的分泌,導(dǎo)致T細(xì)胞功能的癱瘓。近年來(lái),研究PD-L1與膀胱

3、腫瘤復(fù)發(fā)的機(jī)制,以及構(gòu)建與PD-L1相關(guān)的DCs疫苗一直是本研究小組的重點(diǎn)方向之一。
　　研究目的:
　　1.探討膀胱腫瘤患者外周血DCs表型和免疫功能的改變;
　　2.通過(guò)阻斷PD-L1通路,觀察膀胱腫瘤患者外周血DCs免疫功能的變化,探討PD-L1與膀胱腫瘤發(fā)生免疫逃逸的關(guān)系。
　　材料和方法:
　　1.外周血DCs表型和免疫功能檢測(cè):取膀胱腫瘤患者和正常人外周血,進(jìn)行密度梯度離心分離,應(yīng)用重組人粒細(xì)胞

4、-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Recombinanthumangramulocyre-macrophage,rhGM-CSF)和重組人白介素4(RecombinanthumanInterleukin-4,rhIL-4)進(jìn)行體外誘導(dǎo)培養(yǎng)DCs,并從形態(tài)學(xué)和表型兩方面對(duì)所培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組DCs表達(dá)PD-L1、CD1a、HLA和CD83的變化;應(yīng)用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測(cè)其刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme

5、-linkedimmunosorbentassay,ELISA法)檢測(cè)其分泌IL-10和IL-12的變化。
　　2.阻斷PD-L1通路的體外干預(yù)試驗(yàn):DCs分組如下:A組:正常人外周血DCs;B組:膀胱腫瘤患者外周血DCs;C組:膀胱腫瘤患者DCs+PD-L1單抗(5ug/ml);D組:膀胱腫瘤患者DCs+脂多糖(1ug/ml)(Lipopolysaccharide,LPS)。分別進(jìn)行體外培養(yǎng)后,同上述方法檢測(cè)各組DCs表達(dá)CD1

6、a、HLA、CD83,刺激淋巴細(xì)胞增殖以及分泌IL-10和IL-12的變化。
　　結(jié)果:
　　1.膀胱腫瘤患者外周血DCs表達(dá)PD-L1陽(yáng)性率,分泌IL-10含量均顯著高于正常組[(95.06±4.06)％和(76.63±6.90)%,(214.00±13.75)pg/mL和(83.78±7.95)pg/ml](P<0.05),DCs表達(dá)CD83陽(yáng)性率及刺激淋巴細(xì)胞增殖的增殖指數(shù)均分別低于正常組[(16.20±1.91)%和

7、(35.53±1.58)%,(1.50±0.45)和(2.14±0.70)](P<0.05)。
　　2.阻斷PD-L1通路后膀胱腫瘤患者外周血DCs表達(dá)CD83陽(yáng)性率較正常組無(wú)明顯變化[(17.60±3.09)%和(16.21±1.91)%](P>0.05),然而DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力較正常組明顯增強(qiáng)(4.00±1.28和1.49±0.45),分泌IL-12能力增強(qiáng)[(108.30±21.89)pg/ml和(37.17±14

8、.89)pg/ml],而分泌IL-10的能力減弱(108.90±21.77)pg/ml和(214.99±54.99)pg/ml](P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.膀胱腫瘤患者外周血DCs高表達(dá)負(fù)性共刺激分子PD-L1,過(guò)度分泌IL-10及低表達(dá)CD83可能與膀胱腫瘤發(fā)生免疫逃逸有關(guān)。
　　2.阻斷PD-L1通路,可促進(jìn)IL-12、抑制IL-10的分泌,誘導(dǎo)TH1型免疫漂移的發(fā)生,增強(qiáng)未成熟DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的