同種異體富血小板血漿標(biāo)準(zhǔn)化制備的研究.pdf

1、富血小板血漿(PRP)富含多種生長(zhǎng)因子,目前國(guó)內(nèi)外大量文獻(xiàn)報(bào)道這些生長(zhǎng)因子可顯著促進(jìn)骨缺損的修復(fù),并在體外對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的增殖與分化有明顯的促進(jìn)作用。然而也有一些學(xué)者認(rèn)為在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,富血小板血漿無(wú)促進(jìn)骨再生的作用,或在臨床應(yīng)用中PRP復(fù)合植骨材料修復(fù)骨缺損的效果不明顯,其主要原因是各研究人員及臨床工作者所使用的富血小板血漿其制備標(biāo)準(zhǔn)不一致。并且目前研究人員及臨床工作者大都使用患者自體血液,這無(wú)疑會(huì)對(duì)患者的機(jī)體形成二次打擊,且由于各患

2、者存在個(gè)體差異,導(dǎo)致所制備的PRP質(zhì)量不一致,從而影響研究結(jié)果與臨床療效。本課題主要對(duì)同種異體PRP與自體PRP進(jìn)行比較,研究同種異體能否代替自體富血小板血漿,為后續(xù)同種異體富血小板血漿的標(biāo)準(zhǔn)化制備提供一些理論依據(jù),使得制備方法統(tǒng)一、療效確定的同種異體PRP制劑能像其他藥品一樣,被廣泛應(yīng)用于科研和臨床,具有極為廣闊的應(yīng)用前景。
　　【目的】比較自體與同種異體富血小板血漿在體外對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化效應(yīng)的差異,并探索一個(gè)最適的

3、作用濃度。比較自體與同種異體富血小板凝膠在體內(nèi)對(duì)兔橈骨缺損修復(fù)的差異,探討同種異體PRP能否取代自體PRP,為后續(xù)同種異體PRP標(biāo)準(zhǔn)化的制備提供理論依據(jù)。
　　【方法】常規(guī)培養(yǎng)兔BMSCs,分為4組:自體PRP組、異體PRP組、陽(yáng)性對(duì)照組及陰性對(duì)照組。分別在干預(yù)的第4、8、12、16、20、24、28天檢測(cè)各組MTT、堿性磷酸酶活性、細(xì)胞凋亡率并進(jìn)行堿性磷酸酶及鈣結(jié)節(jié)染色,比較各組對(duì)BMSCs增殖、分化與凋亡作用的差異。
　

4、　將健康新西蘭兔隨機(jī)分為自體組、異體組和對(duì)照組3組,建立雙前肢橈骨缺損模型,其中自體組(A組)移植“支架材料+自體BMSCs+自體PRP凝膠”,異體組(B組)移植“支架材料+自體BMSCs+異體PRP凝膠”,對(duì)照組(C組)移植“支架材料+自體BMSCs”。在術(shù)后第1、2、3月分別觀察各組大體標(biāo)本、X線平片、Micro-CT、生物力學(xué)檢測(cè)以及進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)HE染色,比較各組間材料降解及新骨形成等指標(biāo)有無(wú)差異。
　　【結(jié)果】干預(yù)至20

5、天時(shí),異體各濃度組、陽(yáng)性組、陰性組MTT檢測(cè)其OD值各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P<0.05),且最適作用濃度為30％;30%濃度自體組和異體組、陽(yáng)性組、陰性組的堿性磷酸酶活性平均分別為0.418±0.017、0.421±0.014、0.532±0.022、0.578±0.015,其中自體組、異體組分別與陽(yáng)性組及陰性組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);同一時(shí)間相同濃度的自體組與異體組對(duì)細(xì)胞增殖、分化效應(yīng)比較差異大多無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

6、P>0.05)。
　　大體標(biāo)本及X平片顯示A組與B組骨小梁形成、連續(xù)皮質(zhì)骨出現(xiàn)及髓腔再通時(shí)間均早于C組,Micro-CT重建顯示A組與B組材料降解速率、新生骨形成速率及完全塑形時(shí)間均快于C組,骨組織計(jì)量分析結(jié)果顯示A組與B組組織骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)及骨小梁數(shù)目均明顯優(yōu)于C組,但骨小梁厚度比較3組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);最大壓縮載荷各組間兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);組織形態(tài)學(xué)HE染色顯示A組與B組新生血