同種異體富血小板血漿對兔骨缺損修復(fù)作用的實驗研究.pdf

1、目的:
　　本實驗旨在觀察不同時間同種異體富血小板血漿聯(lián)合同種異體骨植入對骨缺損修復(fù)的影像學(xué)和組織學(xué)變化，以探討同種異體富血小板血漿對骨缺損植骨修復(fù)的療效，從而為臨床工作提供實驗理論依據(jù)及指導(dǎo)意見。
　　方法：
　　1實驗分組：選取健康新西蘭大白兔36只，于兔的雙下肢股骨內(nèi)側(cè)髁建立骨缺損的模型后按分籠飼養(yǎng)編號隨機分為A、B兩組，A組（實驗組，n=18），同種異體骨復(fù)合同種異體富血小板血漿植入；B組（對照組,n=18），

2、單純植入同種異體骨，另取6只單純建立骨缺損模型，缺損不做處理作為模型組。
　　2同種異體PRP的制備：心臟取血50ml，分別移入10ml離心管進行二次離心，第一次以200g離心力，離心10min，第二次同樣以200g離心力離心，時間同上，制備PRP約1ml，將PRP與同種異體骨按2:1比例混合激活后，制成復(fù)合型PRP凝膠。
　　3血小板計數(shù)：心臟取血后，使用血細胞分析儀，取少量血液進行血小板計數(shù)，記錄全血中血小板數(shù)，參考La

3、ndesberg法通過兩次離心法制備PRP，同樣對PRP進行血小板計數(shù)，驗證二次離心法制備出的PRP是否滿足實驗要求。
　　4觀察及評價指標(biāo)：第4、8、12周時，采用過量麻醉的方法處死各組實驗動物，首先設(shè)定特定的曝光條件攝股骨髁側(cè)位X光片(距離1m，條件220KV,30mA．曝光時間0.15s)，觀察骨缺損植骨愈合情況。參照Yang氏放射學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)進行評分，并通過X線平片測量記錄其骨缺損區(qū)上、中、下三點的阻射密度值，取平均值進行統(tǒng)

4、計分析。而后截取標(biāo)本對其進行大體標(biāo)本觀察，觀察植入材料的表面變化和骨組織缺損區(qū)域植入骨的生長修復(fù)情況。制作病理組織切片及免疫組化染色，光學(xué)顯微鏡下觀察兔骨缺損再生與修復(fù)情況；并根據(jù)Lane氏組織學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)對每組動物的骨修復(fù)情況進行評分；應(yīng)用顯微圖像分析系統(tǒng)（HMIAS-2000）和專業(yè)圖像分析軟件（Image-Pro Plus6.0）計算其免疫組化切片的染色陽性細胞平均光密度（Mean Optical Density，MOD）值,進行統(tǒng)

5、計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1一般情況及大體觀察：術(shù)后所有動物切口愈合良好，從缺損邊界和骨痂形成情況，術(shù)后4周和8周時，A組比B組缺損區(qū)組織修復(fù)骨缺損較平整，修復(fù)較好，術(shù)后12周，A組和B組骨組織缺損區(qū)域均得到完全修復(fù)，邊界已無法分辨，部分可見異位骨化；
　　2全血及PRP血小板計數(shù)情況：PRP中血小板數(shù)量為全血中的（4.30±0.28）倍，符合Landesberg法通過兩次離心制備PRP的要求，滿足了目前實驗需求；<

6、br>　　3影像學(xué)評分及觀察結(jié)果：術(shù)后4、8、12周各時間點A組與B組兩組放射學(xué)評分比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），A組評分顯著高于B組；而A組與B組兩組術(shù)后各期X線阻射密度比較，A組阻射密度值優(yōu)于B組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；
　　4組織學(xué)評分及鏡下觀察情況：術(shù)后4、8、12周各時期A組和B組Lane組織學(xué)評分比較，實驗組評分均高于對照組，且比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果顯示術(shù)后

7、各時間點實驗組成骨的面積均高于對照組，兩組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而免疫組化觀察結(jié)果顯示第4和8周時A組PDGF、TGF-β免疫組化切片平均光密度（MOD）明顯高于B組,比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明第4和8周時PDGF、TGF-β蛋白的表達量高于對照組；術(shù)后第12周時，PDGF、TGF-β蛋白的表達量均較第4和8周時下降，且實驗組與對照組比較差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：