烏司他丁改善重癥急性胰腺炎大鼠T淋巴細胞凋亡的線粒體機制.pdf

1、目的:觀察烏司他丁對重癥急性胰腺炎大鼠T淋巴細胞凋亡的影響，證實烏司他丁的直接免疫調(diào)節(jié)效應;通過分析烏司他丁對重癥急性胰腺炎大鼠脾淋巴細胞氧化應激水平及線粒體凋亡信號通路等的影響，闡釋其改善T淋巴細胞凋亡的分子機制。
　　方法:清潔級Wistar大鼠36只，隨機分為(n=12):(1)假手術(shù)對照(Sham)組;(2)重癥急性胰腺炎(SAP)模型組;(3)烏司他丁治療組。采用膽胰管逆行注入5％?；悄懰徕c的方法制備大鼠SAP模型，烏司

2、他丁治療組在制作SAP模型后經(jīng)尾靜脈緩慢注射烏司他丁1萬U/Kg體重。術(shù)后24小時首先采用直接免疫熒光法對CD4+和CD8+T淋巴細胞進行標記，再應用Annexin-Ⅴ/PI雙染法標記凋亡細胞，流式細胞儀檢測各組大鼠CD4+、CD8+T淋巴細胞比例及各亞群凋亡細胞比例;以2，7-二氫二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)為熒光探針檢測各組大鼠淋巴細胞內(nèi)活性氧水平，羥胺法檢測血清超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥酸法檢測血清丙二醛含量;以羅丹明

3、123為探針，流式細胞儀檢測各組大鼠淋巴細胞線粒體膜電位，采用酯化鈣黃綠素和氯化鈷共孵育的方法檢測線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放水平。
　　結(jié)果:1、與假手術(shù)對照組相比，SAP模型組CD4+T淋巴細胞比例、CD4+/CD8+T淋巴細胞比值均顯著下降(P＜0.01)，同時CD4+T、CD8+T淋巴細胞亞群凋亡細胞比例均顯著升高(P＜0.01)，尤以CD4+T淋巴細胞為著，烏司他丁治療組CD4+T淋巴細胞的凋亡比例顯著降低(P＜0.01)，C

4、D4+T淋巴細胞比例和CD4+/CD8+T淋巴細胞比值則顯著回升(P＜0.01);2、SAP模型組淋巴細胞內(nèi)ROS熒光強度及血清MDA含量顯著高于假手術(shù)對照組(P＜0.01)，血清SOD活力則顯著低于假手術(shù)對照組(P＜0.01)，烏司他丁治療組淋巴細胞內(nèi)ROS水平和血清MDA含量顯著下降(P＜0.01)，血清SOD活力則顯著回升(P＜0.01);3、SAP模型組線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔異常開放的淋巴細胞比例較假手術(shù)對照組顯著升高(P＜0.01

5、)，線粒體膜電位降低的淋巴細胞比例增多(P＜0.01)，烏司他丁治療組線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的異常開放和線粒體膜電位下降的淋巴細胞比例顯著下降(P＜0.01)。
　　結(jié)論:1、烏司他丁通過減少SAP大鼠CD4+T淋巴細胞的異常凋亡，改善機體免疫抑制狀態(tài)，起到直接的免疫增強效應;2、烏司他丁可顯著降低SAP大鼠脾淋巴細胞內(nèi)ROS水平，提高血清SOD活力及降低血清MDA含量，從而通過有效提高機體對氧自由基的清除能力，降低淋巴細胞凋亡程度，