烏司他丁改善重癥急性胰腺炎大鼠T淋巴細(xì)胞凋亡的線粒體機制.pdf

1、目的:觀察烏司他丁對重癥急性胰腺炎大鼠T淋巴細(xì)胞凋亡的影響，證實烏司他丁的直接免疫調(diào)節(jié)效應(yīng);通過分析烏司他丁對重癥急性胰腺炎大鼠脾淋巴細(xì)胞氧化應(yīng)激水平及線粒體凋亡信號通路等的影響，闡釋其改善T淋巴細(xì)胞凋亡的分子機制。
　　方法:清潔級Wistar大鼠36只，隨機分為(n=12):(1)假手術(shù)對照(Sham)組;(2)重癥急性胰腺炎(SAP)模型組;(3)烏司他丁治療組。采用膽胰管逆行注入5％牛磺膽酸鈉的方法制備大鼠SAP模型，烏司

2、他丁治療組在制作SAP模型后經(jīng)尾靜脈緩慢注射烏司他丁1萬U/Kg體重。術(shù)后24小時首先采用直接免疫熒光法對CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞進行標(biāo)記，再應(yīng)用Annexin-Ⅴ/PI雙染法標(biāo)記凋亡細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測各組大鼠CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例及各亞群凋亡細(xì)胞比例;以2，7-二氫二氯熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)為熒光探針檢測各組大鼠淋巴細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，羥胺法檢測血清超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥酸法檢測血清丙二醛含量;以羅丹明

3、123為探針，流式細(xì)胞儀檢測各組大鼠淋巴細(xì)胞線粒體膜電位，采用酯化鈣黃綠素和氯化鈷共孵育的方法檢測線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放水平。
　　結(jié)果:1、與假手術(shù)對照組相比，SAP模型組CD4+T淋巴細(xì)胞比例、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值均顯著下降(P＜0.01)，同時CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群凋亡細(xì)胞比例均顯著升高(P＜0.01)，尤以CD4+T淋巴細(xì)胞為著，烏司他丁治療組CD4+T淋巴細(xì)胞的凋亡比例顯著降低(P＜0.01)，C

4、D4+T淋巴細(xì)胞比例和CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值則顯著回升(P＜0.01);2、SAP模型組淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS熒光強度及血清MDA含量顯著高于假手術(shù)對照組(P＜0.01)，血清SOD活力則顯著低于假手術(shù)對照組(P＜0.01)，烏司他丁治療組淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS水平和血清MDA含量顯著下降(P＜0.01)，血清SOD活力則顯著回升(P＜0.01);3、SAP模型組線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔異常開放的淋巴細(xì)胞比例較假手術(shù)對照組顯著升高(P＜0.01

5、)，線粒體膜電位降低的淋巴細(xì)胞比例增多(P＜0.01)，烏司他丁治療組線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的異常開放和線粒體膜電位下降的淋巴細(xì)胞比例顯著下降(P＜0.01)。
　　結(jié)論:1、烏司他丁通過減少SAP大鼠CD4+T淋巴細(xì)胞的異常凋亡，改善機體免疫抑制狀態(tài)，起到直接的免疫增強效應(yīng);2、烏司他丁可顯著降低SAP大鼠脾淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS水平，提高血清SOD活力及降低血清MDA含量，從而通過有效提高機體對氧自由基的清除能力，降低淋巴細(xì)胞凋亡程度，