低強(qiáng)度脈沖超聲波經(jīng)PI3K-Akt力化學(xué)傳導(dǎo)通路對(duì)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的作用研究.pdf

1、目的：探討低強(qiáng)度脈沖超聲波（Low Intensity Pulsed Ultrasound，LIPUS）通過(guò)磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol-3-kinase/Serine/threoninekinase，PI3K/Akt)力化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)軟骨細(xì)胞凋亡(Apoptosis)及細(xì)胞外基質(zhì)的影響。
　　方法：選取30只新西蘭大白兔，隨機(jī)選取2

2、4只進(jìn)行OA造模，其余6只作為正常對(duì)照組。造模后第4周處死實(shí)驗(yàn)兔，切取軟骨組織進(jìn)行組織學(xué)觀察，并進(jìn)行Mankin評(píng)分;提取軟骨細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)并鑒定。實(shí)驗(yàn)分組:正常對(duì)照組(NC組)，OA模型組（OA組），OA+LIPUS組（OA+L組），OA+LY294002組（OA+LY組），OA+LY294002+LIPUS組（OA+LY+L組）。軟骨細(xì)胞傳至第二代，NC組及OA組不作任何處理，OA+L組給予LIPUS輻射，OA+LY組給予PI3K

3、/Akt抑制劑LY294002處理，OA+LY+L組給予PI3K/Akt抑制劑LY294002及LIPUS輻射共培養(yǎng)。LIPUS輻射強(qiáng)度為40mW/cm2，20min/d，每周輻射6d;持續(xù)1周后分別收集各組軟骨細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞凋亡率;應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞中Ⅱ型膠原(TypeⅡ Collagen，COL2)、蛋白多糖(Aggrecan，AGG)、基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetallop

4、roteinase，MMP)-13、絲氨酸-蘇氨酸激酶(Serine/threonine kinase，Akt)、磷酸化絲氨酸-蘇氨酸激酶(Phosphorylated Serine/threonine kinase，pAkt)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B celllymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)、P53蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：①流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組均可見(jiàn)凋亡細(xì)胞。與NC組相比，OA組過(guò)度凋亡(P＜0.05);與O

5、A組相比，OA+L組凋亡率降低(P＜0.05)，OA+LY組明顯增高(P＜0.05)，OA+LY+L組無(wú)明顯變化(P＞0.05)，但與OA+L組、OA+LY組相比有明顯差異(P＜0.05)。②與NC組相比，OA組Ⅱ型膠原、蛋白多糖、pAkt、Bcl-2蛋白表達(dá)均有降低，MMP-13、P53均有增高(P＜0.05);與OA組相比，OA+L組Ⅱ型膠原、蛋白多糖、pAkt、Bcl-2蛋白含量均增高，MMP-13、P53均下降(P＜0.05);

6、 OA+LY組Ⅱ型膠原、蛋白多糖、pAkt、Bcl-2蛋白含量均下降，MMP-13、P53均升高(P＜0.05); OA+LY+L組Ⅱ型膠原、蛋白多糖、MMP-13、pAkt、Bcl-2、P53蛋白含量無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但與OA+L組、OA+LY組相比差異顯著(P＜0.05);各組Akt蛋白含量無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：LIPUS體外輻射可抑制OA軟骨細(xì)胞過(guò)度凋亡，并可抑制MMP-13表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)蛋