披針新月蕨的生物活性研究.pdf

1、披針新月蕨(Abacopteris penangiana(Hook.) Ching)是金星蕨科新月蕨屬植物，在我國土家族、苗族的傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中有著悠久的藥用歷史。為了系統(tǒng)揭示傳統(tǒng)藥用植物披針新月蕨的生物活性，本論文主要展開了以下三方面的研究：1、披針新月蕨的藥理作用篩選；2、披針新月蕨的總黃酮質(zhì)量控制；3、披針新月蕨對(duì)前列腺疾病的作用以及其機(jī)制研究。
　　1、披針新月蕨的藥理作用篩選。這一部分主要由3個(gè)小節(jié)組成：(1)對(duì)披針新月蕨體內(nèi)

2、外抗炎作用進(jìn)行了篩選。在體外實(shí)驗(yàn)中，利用脂多糖誘發(fā) RAW264.7細(xì)胞炎癥對(duì)披針新月蕨的抗炎作用進(jìn)行研究；在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，利用棉球引起肉芽腫以及二甲苯誘導(dǎo)耳腫脹評(píng)價(jià)了披針新月蕨的抗炎作用。結(jié)果顯示：披針新月蕨具有抗炎的作用，且總黃酮(TFA)的抗炎活性顯著優(yōu)于總提物(AP)。
　　(2)對(duì)披針新月蕨鎮(zhèn)痛的作用進(jìn)行了篩選。利用熱板實(shí)驗(yàn)以及醋酸扭體實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)了披針新月蕨的鎮(zhèn)痛作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：披針新月蕨具有鎮(zhèn)痛的作用，且TFA的鎮(zhèn)痛活

3、性顯著優(yōu)于AP。
　　(3)對(duì)披針新月蕨抗增殖的活性進(jìn)行了篩選。選用MTT顯色評(píng)價(jià)披針新月蕨對(duì)前列腺癌細(xì)胞(PC-3)、乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、肝癌細(xì)胞(HepG2)以及神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)的抗細(xì)胞生長的作用。結(jié)果顯示：披針新月蕨具有一定抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，且TFA的作用顯著優(yōu)于AP。
　　2、披針新月蕨總黃酮的質(zhì)量控制。這一部分主要由2個(gè)小節(jié)組成：(1)建立了利用紫外分光光度法(UV-Vis)檢測(cè)披針新

4、月蕨總黃酮苷含量的方法。結(jié)果表明：標(biāo)準(zhǔn)品Triphyllin A的最大吸收波長為276 nm。Triphyllin A在0.0125-0.4 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9998)，且精密度，穩(wěn)定性，重復(fù)性以及加樣回收率滿足定量分析的需求。依照上述建立的含量測(cè)定方法檢測(cè)TFA中總黃酮苷的含量為69.4％。
　　(2)建立了利用高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)TFA指標(biāo)成分含量的方法。結(jié)果表明：標(biāo)準(zhǔn)品Triphyllin A

5、在0.023-1.75 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9998)；Eruberin B在0.084-2.70 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9994)；Abacopterin I在0.05-1.60 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9998)，且精密度，穩(wěn)定性，重復(fù)性和回收率滿足定量分析的要求。依照上述建立的化合物含量測(cè)定方法檢測(cè)TFA中化合物Triphyllin A、Eruberin B與Abacopterin

6、I的含量，其含量分別為118.6 mg/g、96.7 mg/g和53.2 mg/g。
　　3、披針新月蕨對(duì)前列腺疾病的作用以及其機(jī)制研究。本部分主要由3個(gè)小節(jié)組成：(1)評(píng)價(jià)了酸水解產(chǎn)物(AHT)與TFA對(duì)慢性前列腺炎的作用以及機(jī)理。本部分篩選了 AHT與 TFA對(duì)細(xì)菌(CBP)以及非細(xì)菌性(CNP)前列腺炎的作用，并對(duì)其抗 CNP的作用機(jī)制進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：AHT與TFA對(duì)細(xì)菌以及非細(xì)菌性前列腺炎有良好的改善作用。其抗C

7、NP的作用機(jī)理可以從三方面闡述：a、AHT與TFA能有效清除自由基、提高體內(nèi)抗氧化酶的活性并且可以保護(hù)正常前列腺的生理活性。b、AHT與TFA調(diào)節(jié)前列腺炎癥部位的血瘀，減緩前列腺的局部充血，使腺管通暢。c、AHT與TFA調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)途徑，減少炎癥因子與促纖維化細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
　　(2)評(píng)價(jià)了AHT與TFA對(duì)良性前列腺增生(BPH)的作用。利用去勢(shì)大鼠皮下注射丙酸睪酮誘發(fā)大鼠BPH。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：AHT與TFA能夠劑量依賴性

8、的降低丙酸睪酮誘發(fā)的去勢(shì)大鼠BPH。其作用機(jī)制可能是通過降低前列腺中雙氫睪酮和生長因子的水平，并通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt與NF-κB信號(hào)通路，緩解前列腺組織的炎癥反應(yīng)、減少氧化應(yīng)激和降低前列腺細(xì)胞的增殖來發(fā)揮藥理作用。
　　(3)評(píng)價(jià)了披針新月蕨黃酮類化合物抑制前列腺癌細(xì)胞(PC-3)的增殖作用以及其機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：這其中活性最好的是化合物Abacopterin C(IC50為4.62±0.43μM)。我們對(duì)其可能存在的作用機(jī)

9、理進(jìn)行了探究：a、利用 Hoechst33258染色觀察Abacopterin C誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞的凋亡。利用Western blot(WB)檢測(cè)Abacopterin C對(duì)Bax與 Bcl-2細(xì)胞內(nèi)水平的影響。結(jié)果顯示：Abacopterin C可以濃度依賴性地引發(fā) PC-3細(xì)胞死亡；Abacopterin C處理后可以顯著地增加Bax的水平，同時(shí)減少Bcl-2的水平；b、利用 WB檢測(cè) Abacopterin C對(duì)炎癥相關(guān)因子含量水