荷葉鐵線蕨和鹿角蕨遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、本實驗以荷葉鐵線蕨(Adiantumreniformevar.sinense)為材料，研究了不同激素對荷葉鐵線蕨原葉體增殖的影響，優(yōu)化了荷葉鐵線蕨的快繁體系。并以實驗室條件下正常分化的孢子體走莖為材料探討不同生長調(diào)節(jié)劑對該蕨類植物通過GGB途徑再生的影響，包括GGB的誘導(dǎo)，增殖與分化，建立了荷葉鐵線蕨的直接再生體系;以鹿角蕨(Platyceriumwallichii)孢子葉為材料，對GGB誘導(dǎo)，GGB增殖與分化，不定芽誘導(dǎo)生根整個過程不

2、同生長調(diào)節(jié)劑的影響進(jìn)行了研究;最后嘗試了用荷葉鐵線蕨的原葉體，鹿角蕨的GGB做為受體材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，對兩種蕨類植物的遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行了摸索。主要結(jié)果如下:
　　 以荷葉鐵線蕨孢子體走莖為材料誘導(dǎo)出GGB，成功的開辟了荷葉鐵線蕨通過GGB的再生途徑。結(jié)果表明荷葉鐵線蕨誘導(dǎo)GGB的最適培養(yǎng)基為MS+BA0.5mg/L+2，4-D1.0mg/L，此時誘導(dǎo)率可達(dá)55.56％，而適合荷葉鐵線蕨GGB增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA1.

3、0mg/L+NAA0.1mg/L，適合荷葉鐵線蕨GGB分化的培養(yǎng)基為MS+ZT0.1mg/L，此時分化率達(dá)到了38.29％;并在前人研究的基礎(chǔ)上優(yōu)化了荷葉鐵線蕨原葉體增殖培養(yǎng)基，實驗得到的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L。
　　 與荷葉鐵線蕨相比，鹿角蕨GGB較容易誘導(dǎo)，且誘導(dǎo)得到的GGB增殖和分化率也很高。鹿角蕨誘導(dǎo)GGB采用的外植體為幼嫩孢子葉，且在MS+BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L

4、和MS+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L兩種培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率均可達(dá)到100％，實驗中材料的放置方式以及葉片表面是否劃傷對GGB的誘導(dǎo)沒有影響，而適合鹿角蕨GGB增殖的培養(yǎng)基為MS+KT1.0mg/L+NAA0.1mg/L，在基本MS培養(yǎng)基中鹿角蕨GGB即可100％分化。此外，適合鹿角蕨孢子體生根的培養(yǎng)基為:MS+NAA0.5mg/L。
　　 最后初步確立荷葉鐵線蕨和鹿角蕨的遺傳轉(zhuǎn)化體系:
　　 以荷葉鐵線蕨原葉體為

5、材料，預(yù)培養(yǎng)、共培養(yǎng)培養(yǎng)基為:MS+BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L;篩選培養(yǎng)基為:MS+BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+Kan100mg/L+cef400mg/L;預(yù)培養(yǎng)時間為2天;共培養(yǎng)時間為2天;OD600=0.4，侵染時間10min;用含250mg/LCef液體MS培養(yǎng)基漂洗1-2次后，將外植體接種子含250mg/LCef固體MS再生培養(yǎng)基上，推遲篩選15d;然后將外植體接種于篩選培養(yǎng)基上進(jìn)行選擇培養(yǎng)。以鹿角蕨