建立xMAP液態(tài)芯片和熒光定量PCR法檢測(cè)福州地區(qū)急性呼吸道感染兒童呼吸道病毒的研究.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用luminex xMAP技術(shù)建立一種液態(tài)芯片,能夠快速、準(zhǔn)確檢測(cè)多種呼吸道病毒,包括人冠狀病毒-NL63(HCoV-NL63)、-HKU1(HCoV-HKU1)、-OC43(HCoV-OC43)、-229E(HCoV-229E),人偏肺病毒(HMPV)和人博卡病毒(HBoV)。建立熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)InfVA,InfVB,RSV,PIV1,PIV2,PIV3,Adenovirus,HCoV-NL63、-HKU1

2、、-OC43、-229E,HMPV和HBoV。應(yīng)用建立好的以上方法檢測(cè)福州地區(qū)急性呼吸道感染兒童呼吸道病毒病原并進(jìn)行臨床分析。
　　方法：
　　應(yīng)用DNAMAN7軟件設(shè)計(jì)對(duì)病毒保守區(qū)的引物和探針,建立針對(duì)以上病毒的液態(tài)芯片和FQ-PCR法。收集2011年12月~2012年9月福建省立醫(yī)院住院部?jī)嚎撇》考毙院粑栏腥净純旱难适米訕?biāo)本,共計(jì)299例。利用建立好的液態(tài)芯片和FQ-PCR檢測(cè)收集到的標(biāo)本。
　　結(jié)果：
　

3、　1、建立的液態(tài)芯片檢測(cè)靈敏度除GAPDH和HCoV-OC43為103copies/μl~108copies/μl外,其它病毒如HCoV-NL63、HCoV-229E、HCoV-HKU1、HMPV和HBoV均在104copies/μl~108copies/μl之間。液態(tài)芯片特異性試驗(yàn)中7種熒光微球能夠檢測(cè)出相應(yīng)靶病毒,不與其它病毒發(fā)生交叉反應(yīng),特異性好。其批內(nèi)批間重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示中位熒光強(qiáng)度值變異系數(shù)分別在0.52％~1.39%和1.

4、92%~3.44%范圍內(nèi)。
　　2、建立的InfVA、InfVB、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、Adenovirus、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229E、HMPV和HBoV的熒光定量PCR法有良好的敏感性與特異性。
　　3、2011年12月~2012年9月福州地區(qū)收集的299例急性呼吸道感染患兒中,HCoV-NL63、HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229

5、E、HMPV與HBoV分別檢出10例(3.3%)、2例(0.7%)、21例(7.0%)、3例(1.0%)、18例(6.0%)、26例(8.7%)。InfVA、InfVB、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、Adeno分別檢出5例(1.7%)、7例(2.3%)、54例(18.1%)、1例(0.3%)、1例(0.3%)、12(4.0%)、42(14.0%)。ARTI患兒病毒總檢出率為58.9%。病毒檢測(cè)陽性患兒中11.9%(21/176)

6、存在2-4種病毒的混合感染。HCoV-OC43、-229E、-NL63感染高峰在春季,HCoV-HKU1、HMPV,HBoV感染高峰在冬春季,主要侵犯≤1歲兒童。
　　結(jié)論：
　　1、本研究成功建立了能并行檢測(cè)冠狀病毒NL63、-HKU1、-OC43、-229E,HMPV和HBoV的液態(tài)芯片法。
　　2、2011年11月~2012年9月福州地區(qū)急性呼吸道感染患兒中,存在InfVA、InfVB、RSV、PIV1、PIV2