中藥黃芩苷通過下調(diào)miR-294抑制小鼠D3胚胎干細(xì)胞增殖能力.pdf

1、研究目的:研究中藥單體黃芩苷、葛根素和人參皂苷Rg1是否通過改變小鼠胚胎干細(xì)胞miR-290家族成員的表達(dá)影響D3系小鼠胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcells,ESCs)的增殖能力。
　　方法:通過細(xì)胞計(jì)數(shù)繼而計(jì)算倍增時(shí)間觀察各中藥單體對(duì)ESCs增殖能力的改變;進(jìn)行PI染色檢測(cè)細(xì)胞周期的變化;應(yīng)用qRT-PCR檢測(cè)原癌基因c-myc、c-jun和c-fos以及miR-290家族中多種miRNAs的表達(dá)的改變;最后采用脂質(zhì)

2、體轉(zhuǎn)染法過表達(dá)相應(yīng)的miRNAs,得到gain-of-function效應(yīng),觀測(cè)其對(duì)ESCs增殖能力的影響和對(duì)目的基因表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果:1、黃芩苷顯著抑制ESCs的增殖能力,表現(xiàn)為細(xì)胞倍增時(shí)間延長(zhǎng),以及明顯的G2/M期阻滯和S期細(xì)胞減少。2、黃芩苷顯著下調(diào)了ESCs中原癌基因c-jun和c-fos的表達(dá)。3、黃芩苷明顯下調(diào)ESCs中miR-290家族中的miR-294的表達(dá)水平。4、miR-294過表達(dá)減少ESCs細(xì)胞倍