豬前體脂肪細(xì)胞與肌衛(wèi)星細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)體系建立及生長(zhǎng)特性初步研究.pdf

1、脂肪組織與肌肉組織通過(guò)旁分泌、內(nèi)分泌產(chǎn)生相互作用，參與機(jī)體脂肪沉積與肌肉發(fā)育過(guò)程，在物質(zhì)與能量代謝過(guò)程中具有重要調(diào)節(jié)功能，建立脂肪細(xì)胞與肌細(xì)胞的聯(lián)合培養(yǎng)體系，有助于研究?jī)深惣?xì)胞間的作用關(guān)系。 本實(shí)驗(yàn)以初生健康長(zhǎng)白仔豬為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分離、純化前體脂肪細(xì)胞與骨骼肌肌衛(wèi)星細(xì)胞，采用MTT比色、油紅O染色、Desmin免疫組化、HE染色和半定量RT-PCR等方法，建立了一種豬前體脂肪細(xì)胞與肌衛(wèi)星細(xì)胞體外直接聯(lián)合培養(yǎng)的適宜體系，并對(duì)聯(lián)合培養(yǎng)

2、細(xì)胞的增殖分化等生長(zhǎng)特性進(jìn)行了初步研究，得出如下研究結(jié)果： 1.比較了接種濃度比對(duì)聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞增殖率的影響。在13個(gè)接種濃度比中，MTT比色結(jié)果顯示，當(dāng)前體脂肪細(xì)胞與肌衛(wèi)星細(xì)胞以2.5×10<'7>個(gè)/L與1×10<'8>個(gè)/L接種時(shí)，聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞在測(cè)定第9天的增殖率可達(dá)到最大。 2.分析了貼壁時(shí)間對(duì)聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞存活率的影響。隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞貼壁率增大，但在48～66 h間趨于穩(wěn)定，66 h后部分細(xì)胞進(jìn)入增

3、殖分裂期。 3.研究了培養(yǎng)基及血清濃度對(duì)聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞存活率的影響。細(xì)胞貼壁率結(jié)果顯示，有血清培養(yǎng)基較無(wú)血清培養(yǎng)基有利于細(xì)胞的存活，其中DMEM/F12(1：1)培養(yǎng)基較DMEM、RPMI及M199培養(yǎng)效果好，聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞存活率在10～200 mL/L的范圍內(nèi)呈濃度依賴性。 4.分析了聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)與增殖特性的變化。形態(tài)學(xué)動(dòng)態(tài)觀察、2～9天MTT比色結(jié)果顯示，聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞貼附后呈纖維樣伸展延伸，增殖率高于單獨(dú)兩類細(xì)胞

4、，但接觸匯合后交織重疊生長(zhǎng)，7～9天維持緩慢的增殖過(guò)程，進(jìn)入平臺(tái)期較單獨(dú)兩類細(xì)胞晚。 5.形態(tài)學(xué)觀察聯(lián)合培養(yǎng)對(duì)脂肪細(xì)胞與肌細(xì)胞分化過(guò)程的影響。油紅O染色、HE染色結(jié)果顯示，聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞中僅觀察到極少量的小脂滴，且呈現(xiàn)較晚；多核肌細(xì)胞形成與肌管的融合在聯(lián)合培養(yǎng)中顯著，但沒(méi)有單獨(dú)肌細(xì)胞明顯，且形成較晚； 6.分子水平RT-PCR.檢測(cè)聯(lián)合培養(yǎng)對(duì)脂肪細(xì)胞與肌細(xì)胞分化過(guò)程的影響。第5、10天的聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞皆表達(dá)LPL、Myf5