同種移植急性排斥反應(yīng)中Pim2的作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的
　　 器官移植目前已成為治療多種終末期疾病的的有效手段。然而發(fā)生于移植術(shù)后的數(shù)周或數(shù)月的急性排斥反應(yīng)仍是導(dǎo)致治療失敗的主要因素。因此器官移植術(shù)的成敗在很大程度上取決于對(duì)急性移植排斥反應(yīng)的防治。既往研究表明T細(xì)胞，尤其是CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答在移植排斥反應(yīng)的效應(yīng)機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。T細(xì)胞存活的信號(hào)通路主要包括AKT(also known as protein kinase B，PKB)-mTOR(mammali

2、an Target of Rapamycin)信號(hào)通路和Pim(Proviralintegration site of murine)激酶信號(hào)通路。既往研究表明，在細(xì)胞因子或抗原激活的T細(xì)胞信號(hào)通路中，T細(xì)胞的生長及存活不完全依賴AKT-mTOR通路，阻斷AKT-mTOR信號(hào)通路雖可部分抑制T細(xì)胞激活，但不能完全阻斷;Pim激酶信號(hào)通路可作為選擇性通路。但是有關(guān)Pim激酶信號(hào)通路在同種反應(yīng)性T細(xì)胞的作用尚未見報(bào)道。推測同時(shí)阻滯這兩條信號(hào)

3、通路，有可能更好地抑制移植受者同種反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)的急性排斥，有利于誘導(dǎo)長期移植耐受。已知CD4+T細(xì)胞可分為CD4+CD25-效應(yīng)T細(xì)胞和CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)兩種亞群。其中同種抗原特異性Treg可通過抑制效應(yīng)T細(xì)胞的激活、增殖和促進(jìn)其凋亡，誘導(dǎo)移植物長期耐受。近來有研究報(bào)道Treg細(xì)胞可在雷帕霉素(Rapamycin，RAPA)的作用下優(yōu)勢擴(kuò)增并能很好地保持其抑制功能;而自然調(diào)節(jié)性Treg中Foxp3

4、基因能夠誘導(dǎo)pim2基因的表達(dá)。以上研究提示pim2與Treg細(xì)胞功能密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究中，應(yīng)用SAGE(sequencing-based serialanalysis of gene expression，序列基因表達(dá)分析)技術(shù)建立了同種移植及同系移植組CD4+T細(xì)胞mRNA標(biāo)簽庫，分析發(fā)現(xiàn)pim2基因在同種移植急性排斥組明顯高表達(dá)，是同系移植組表達(dá)量的5倍，進(jìn)一步提示pim2在同種移植急性排斥中具有重要作用。
　　

5、Pim家族是原癌基因編碼三種絲/蘇氨酸激酶，包括Pim1，Pim2 and Pim3，屬于鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶且在序列上具有很高的同源性。pim2基因位于X染色體上(Xp11)，編碼三種分子量的蛋白質(zhì)(34kD，37 kD和40 kD)。Pim激酶缺乏調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域，不需磷酸化激活?？赡苁欠g后組成性激活。Pim激酶由轉(zhuǎn)錄翻譯和蛋白體降解調(diào)控。STAT(Signal transducers and activators oftranscr

6、iption，信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子)通過與其同源配體銜接而成為pim基因的轉(zhuǎn)錄因子。Pim蛋白激酶活性依賴于mRNA穩(wěn)定性，Pim通過與SOCS（Suppressor of cytokine signaling，細(xì)胞因子信號(hào)抑制物）結(jié)合從而抑制JAK(Janus Kinase)/STAT信號(hào)。多項(xiàng)研究表明Pim激酶通過調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在許多生理病理過程中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞代謝和蛋白質(zhì)翻譯。在許多造血系統(tǒng)

7、惡性疾病及實(shí)體腫瘤中均發(fā)現(xiàn)pim原癌基因的高表達(dá)（尤其是Pim1和Pim3），并與腫瘤細(xì)胞生長存活及化療藥物抵抗密切相關(guān)。據(jù)報(bào)道目前有幾種Pim特異小分子抑制劑正用于腫瘤治療臨床前期實(shí)驗(yàn)。盡管已有pim2通路在造血系統(tǒng)腫瘤和實(shí)體腫瘤中作用的研究報(bào)道，但是有關(guān)pim2在同種移植急性排斥中的作用及分子機(jī)制尚未見報(bào)道。Pim2與CD4+T細(xì)胞，尤其是Treg密切相關(guān)，有可能作為誘導(dǎo)移植免疫耐受的靶向分子;此外Pim2靶向小分子化合物正在研制中

8、，因此Pim2有可能作為同種移植急性排斥診斷和治療的分子靶點(diǎn)。
　　 綜上所述，本論文的科學(xué)假設(shè)是:pim2可能通過靶向CD4+T細(xì)胞的凋亡和調(diào)節(jié)CD4+Treg增殖及抑制，在同種移植急性排斥反應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用。本論文研究目的是試圖闡明Pim2激酶在同種移植急性排斥反應(yīng)中的作用及分子機(jī)制，從而為靶向Pim2誘導(dǎo)誘導(dǎo)移植免疫耐受提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為臨床器官移植排斥的治療提供新的靶點(diǎn)，因此具有重要的理論和實(shí)際意義。
　　

9、 第一部分Pim2在小鼠同種皮膚移植急性排斥反應(yīng)中的動(dòng)態(tài)表達(dá)
　　 研究方法
　　 1、建立小鼠同種皮膚移植模型
　　 無菌條件下將C57BL/6小鼠背部全厚度皮膚移植到BALB/c小鼠背部即為同種移植;將BALB/c小鼠的背部全厚度皮膚移植到BALB/c小鼠背部即為同系移植，以此作為對(duì)照組。
　　 2、分析pim2基因在排斥高峰時(shí)的表達(dá)狀況
　　 移植術(shù)后14天左右，同種移植皮片完全排斥而同系

10、移植存活完好。利用RT-PCR技術(shù)分別檢測兩組小鼠脾細(xì)胞、脾CD4+T細(xì)胞及移植皮片中的pim2基因表達(dá)。
　　 3、同種排斥組與同系對(duì)照組的脾臟和移植皮片的病理學(xué)表現(xiàn)以及Pim2蛋白的原位表達(dá)
　　 通過病理組織切片HE染色及抗Pim2抗體對(duì)組織切片的免疫組化染色進(jìn)一步比較同種排斥組與同系對(duì)照組的脾臟和移植皮片的病理學(xué)表現(xiàn)差異以及Pim2蛋白原位表達(dá)差異情況。
　　 4、Pim2蛋白在同種移植排斥反應(yīng)過程中的動(dòng)

11、態(tài)表達(dá)情況
　　 移植后不同時(shí)間，取受體小鼠的脾及移植皮片，Western Blot檢測Pim2蛋白表達(dá)狀況。
　　 研究結(jié)果
　　 1、pim2 mRNA在同種移植組的CD4+T細(xì)胞、脾臟和移植皮片中的表達(dá)水平均明顯高于同系對(duì)照組;而且在同種移植組中，pim2 mRNA在脾臟中的的表達(dá)水平高于移植皮片，但是同系對(duì)照組中二者之間無明顯差異。結(jié)果提示:同種移植急性排斥反應(yīng)較強(qiáng)時(shí)，pim2基因高表達(dá)，pim2基因是同

12、種移植急性排斥反應(yīng)正相關(guān)基因。
　　 2、與同系對(duì)照組相比，同種排斥組的脾和移植皮片均發(fā)生明顯組織病理改變，細(xì)胞浸潤明顯; Pim2蛋白高表達(dá)于同種排斥組的脾和移植皮片的細(xì)胞質(zhì)中，但同系對(duì)照組脾和移植皮片中表達(dá)微弱或不表達(dá)。結(jié)果提示Pim2激酶參與同種急性排斥反應(yīng)所導(dǎo)致的移植物損害和組織損傷過程。
　　 3、Western Blot結(jié)果顯示同種移植術(shù)后Pim2蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)趨勢與同種移植急性排斥反應(yīng)的發(fā)生過程幾乎完全一致

13、，即脾或移植皮片中的Pim2蛋白表達(dá)量隨著同種急性排斥反應(yīng)的增強(qiáng)而升高。該結(jié)果進(jìn)一步提示Pim2蛋白激酶參與同種移植急性排斥反應(yīng)并參與對(duì)移植物的排斥。
　　 第二部分抑制pim2基因表達(dá)對(duì)延長同種移植中移植物存活的影響
　　 第一部分研究證實(shí)pim2在同種移植急性排斥期高表達(dá)，因此本部分進(jìn)一步研究抑制Pim2后對(duì)同種移植排斥的效應(yīng)及作用機(jī)制。
　　 研究方法
　　 1、確定pim抑制劑4a對(duì)pim2抑制的

14、最適濃度和時(shí)間
　　 首先制備野生型BALB/c小鼠脾細(xì)胞懸液，然后將該脾細(xì)胞分別與不同濃度的Pim抑制劑4a混合，培養(yǎng)不同時(shí)間，最后利用RT-PCR檢測4a處理后脾細(xì)胞中pim2基因的表達(dá)水平并以pim2 mRNA相對(duì)灰度值最低來確定Pim抑制劑4a對(duì)pim2抑制的最適濃度和時(shí)間。
　　 2、T細(xì)胞中的pim2被4a抑制后對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的同種移植急性排斥的影響
　　 將B6小鼠的全厚度皮膚移植到SCID（Seve

15、re Combined Immunodeficiency，嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷）小鼠背部而建立SCID小鼠移植模型，3周左右移植皮片愈合，生長完好。此時(shí)將預(yù)先經(jīng)過4a或DMSO（對(duì)照）體外處理的野生型BALB/c小鼠脾臟T細(xì)胞通過腹腔注射過繼到上述已行移植術(shù)的SCID鼠體內(nèi)，構(gòu)建同種移植急性排斥反應(yīng)模型，T細(xì)胞過繼后，每天觀察兩組移植皮片的生存狀況直至對(duì)照組移植皮片排斥。
　　 3、pim2對(duì)同種移植急性排斥反應(yīng)中的同種反應(yīng)性T細(xì)胞

16、的作用及通路
　　 利用T細(xì)胞分離柱分離純化出同種移植排斥高峰期小鼠脾臟T細(xì)胞，然后利用Pim特異抑制劑4a體外處理24h，利用流式細(xì)胞術(shù)分析T細(xì)胞的凋亡率。采用WesternBlot方法檢測4a對(duì)同種反應(yīng)性T細(xì)胞中磷酸化BAD(Ser112)的影響。
　　 4、同種移植急性排斥高峰期脾CD4+CD25-T細(xì)胞和CD4+CD25+T細(xì)胞中pim2mRNA的表達(dá)狀況
　　 利用免疫磁珠分選法分離出同種移植排斥高峰期

17、BALB/c小鼠脾CD4+CD25-T細(xì)胞和CD4+CD25+T細(xì)胞兩個(gè)亞群，然后利用RT-PCR方法檢測兩群細(xì)胞中pim2mRNA的表達(dá)狀況。
　　 研究結(jié)果
　　 1、 pim2 mRNA的表達(dá)量與4a呈劑量依賴關(guān)系，但非時(shí)間依賴關(guān)系。最終選定5M4a和24h作為4a對(duì)pim2抑制的最適濃度和最適作用時(shí)間。
　　 2、4a處理組小鼠移植皮片的平均生存時(shí)間約為31.2±2.3天，而DMSO對(duì)照組小鼠移植皮片的平

18、均生存時(shí)間約為19.5±1.7天。與對(duì)照組比較，4a處理組同種移植物生存期明顯延長約12天(P＜0.05)，而且其脾臟重量和大小明顯減小。結(jié)果表明4a通過阻滯T細(xì)胞中的pim2，明顯延長了同種移植物存活，降低了受體對(duì)同種移植物的排斥，提示pim2通過T細(xì)胞介導(dǎo)了對(duì)同種移植物的急性排斥。
　　 3、4a處理組的T細(xì)胞凋亡率明顯升高，與對(duì)照組有顯著差異，P＜0.05，提示阻滯T細(xì)胞中的pim2，增加了同種反應(yīng)性T細(xì)胞的凋亡;4a處理

19、組的BAD(Ser112)磷酸化水平明顯降低，提示4a通過降低Pim2激酶的下游通路BAD(Ser112)磷酸化水平誘導(dǎo)同種反應(yīng)性T細(xì)胞的凋亡，從而部分阻斷由同種反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)的針對(duì)移植物的特異性免疫應(yīng)答。結(jié)果提示:Pim2通過磷酸化BAD Ser112位點(diǎn)發(fā)揮抗同種反應(yīng)性T細(xì)胞凋亡作用，進(jìn)而介導(dǎo)對(duì)同種移植物的急性排斥。
　　 4、在同種移植排斥高峰期，pim2基因在CD4+CD25-T細(xì)胞中高表達(dá)，約為CD4+CD25+T細(xì)

20、胞中pim2基因含量的兩倍，提示pim2優(yōu)勢介導(dǎo)同種反應(yīng)性CD4+CD25-T細(xì)胞的存活，從而發(fā)揮增強(qiáng)同種移植急性排斥的作用。
　　 第三部分Pim2對(duì)同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Treg細(xì)胞活性的影響
　　 前兩部分研究證明pim2增強(qiáng)同種移植急性排斥反應(yīng)，但是結(jié)果提示同種移植急性排斥中pim2在CD4+CD25+Treg中也有表達(dá)，因此不能排除pim2對(duì)CD4+CD25+Treg細(xì)胞的影響。為此，本部分研究了pi

21、m2對(duì)同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Treg細(xì)胞活性的影響:
　　 研究方法
　　 1、pim2抑制對(duì)CD4+CD25+Treg細(xì)胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的影響
　　 利用T細(xì)胞分離柱純化分離同種移植急性排斥反應(yīng)高峰期小鼠脾T細(xì)胞，與5M4a混合培養(yǎng)24h后，采用RT-PCR方法檢測細(xì)胞Foxp3 mRNA的變化。
　　 2、pim2抑制對(duì)CD4+CD25+T細(xì)胞抑制功能的影響
　　 利用免疫磁

22、珠分選方法分離出同種移植排斥高峰期BALB/c小鼠脾臟中的CD4+CD25-T細(xì)胞和CD4+CD25+T細(xì)胞。先將CD4+CD25+T細(xì)胞與4a體外共同培養(yǎng)24h，然后再與CD4+CD25-T細(xì)胞按照1∶6的比例混合培養(yǎng)12h，最后利用流式細(xì)胞術(shù)分析CD4+CD25-T細(xì)胞的凋亡率。
　　 3、Pim2激酶對(duì)雷帕霉素選擇性擴(kuò)增Foxp3+Treg細(xì)胞的影響
　　 建立BALB/c小鼠同種移植模型，移植術(shù)后第1天開始每天腹

23、腔注射雷帕霉素，放線菌酮，或雷帕霉素+放線菌酮，同時(shí)設(shè)生理鹽水注射對(duì)照組。直至對(duì)照組小鼠移植皮片發(fā)生排斥時(shí)停止注射。此時(shí)收集不同處理組小鼠脾細(xì)胞，利用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面的CD4、CD25及細(xì)胞質(zhì)中的Foxp3，以此確定CD4+CD25+Foxp3+Treg所占總細(xì)胞比例的變化。隨后，將純化出的雷帕霉素組和聯(lián)合藥物組CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞與Pim2單克隆抗體或4a在體外共培養(yǎng)12h，流式細(xì)胞術(shù)分析抑制Pim2對(duì)CD4+C

24、D25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例的影響。
　　 研究結(jié)果
　　 1、4a在抑制同種反應(yīng)性T細(xì)胞中pim2表達(dá)的同時(shí)，也降低了Foxp3的基因表達(dá)水平，表明阻滯pim2能夠降低同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的增殖活化。結(jié)果提示Pim2激酶對(duì)同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的增殖活化是必要的。
　　 2、4a顯著降低同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞誘導(dǎo)效應(yīng)性

25、CD4+CD25-T細(xì)胞凋亡的能力，表明阻滯pim2降低了CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的抑制功能，提示Pim2激酶對(duì)同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的抑制功能也是必要的。
　　 3、與對(duì)照組相比，雷帕霉素組和聯(lián)合藥物組小鼠脾CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞比例明顯升高，而同種反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞比例卻顯著下調(diào)，提示在同種移植模型中，雷帕霉素選擇性擴(kuò)增CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞?？筆im2單

26、克隆抗體或4a都明顯下調(diào)了雷帕霉素組和聯(lián)合藥物組CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的比例。結(jié)果提示在同種移植模型中，阻滯Pim2激酶可明顯降低CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞在雷帕霉素的作用下的擴(kuò)增水平，提示Pim2激酶對(duì)雷帕霉素選擇性擴(kuò)增同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞同樣是必要的。
　　 第四部分放線菌酮抑制同種移植急性排斥及與Pim2的相關(guān)性研究
　　 鑒于文獻(xiàn)報(bào)道放線菌酮可以抑制Pim激酶

27、活性，因此推測放線菌酮可能通過抑制Pim激酶抑制急性同種移植排斥。
　　 研究方法
　　 1、放線菌酮對(duì)pim2表達(dá)的影響
　　 為探索放線菌酮抑制pim2的最適濃度，利用小鼠T細(xì)胞分離柱從野生型BALB/c小鼠脾細(xì)胞中分離純化T細(xì)胞，分別與不同濃度的放線菌酮混合培養(yǎng)24h，最后利用RT-PCR分析藥物處理后T細(xì)胞中pim2基因的表達(dá)并以pim2mRNA相對(duì)灰度值來確定放線菌酮抑制pim2的最適濃度。
　　

28、 2、放線菌酮體外阻滯T細(xì)胞pim2后對(duì)同種移植物存活的影響
　　 將B6小鼠的背部全厚度皮片移植到SCID小鼠背部建立SCID小鼠移植模型，大約3周后移植皮片愈合生長完好。此時(shí)將預(yù)先經(jīng)過放線菌酮或DMSO（對(duì)照）體外處理的野生型BALB/c小鼠脾T細(xì)胞通過腹腔注射過繼到上述已行移植術(shù)的SCID鼠體內(nèi)。構(gòu)建同種移植急性排斥反應(yīng)模型，細(xì)胞過繼后每天觀察移植皮片的生存狀況。
　　 3、藥物體內(nèi)處理對(duì)同種移植物存活的影響

29、r>　　 建立BALB/c小鼠同種移植模型，移植術(shù)后第1天開始每天腹腔注射放線菌酮、雷帕霉素或雷帕霉素+放線菌酮，直至對(duì)照組小鼠移植皮片發(fā)生排斥時(shí)結(jié)束藥物注射。每天觀察每組移植皮片的生存狀況并繪制同種移植皮片生存曲線。
　　 4、放線菌酮延長同種移植物存活的機(jī)制
　　 建立BALB/c小鼠同種移植模型，移植術(shù)后第1天開始每天腹腔注射放線菌酮、雷帕霉素或雷帕霉素+放線菌酮，直到對(duì)照組（腹腔注射生理鹽水）小鼠皮片完全被排斥

30、。此時(shí)制備脾細(xì)胞懸液并采用流式細(xì)胞術(shù)分析放線菌酮、雷帕霉素或雷帕霉素+放線菌酮體內(nèi)給藥分別對(duì)同種反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞和CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例的影響。
　　 研究結(jié)果
　　 1、與對(duì)照組相比，放線菌酮明顯抑制pim2基因的表達(dá)，呈劑量依賴性，即50μM的放線菌酮能夠更有效地抑制pim2，且無明顯的細(xì)胞毒性。
　　 2、與對(duì)照組相比，放線菌酮處理組的移植皮片延長存活約7天(p＜0.05)，提示

31、放線菌酮可通過抑制T細(xì)胞中的pim2延長同種移植物的存活時(shí)間。
　　 3、結(jié)果顯示，對(duì)照組小鼠移植皮片的平均生存時(shí)間約為12.4±1.10天，注射放線菌酮組小鼠皮片的平均生存時(shí)間約為17.6±0.89天，注射雷帕霉素組小鼠皮片的平均生存時(shí)間約為19.6±1.52天，放線菌酮+雷帕霉素聯(lián)合組小鼠皮片的平均生存時(shí)間約為16.8±1.64天，比對(duì)照組分別延長約5天，7天和4天，具有顯著差異，P＜0.05。但是，聯(lián)合注射組與單獨(dú)注射放線

32、菌酮組之間無顯著差異，P＞0.05。提示放線菌酮體內(nèi)應(yīng)用明顯延長同種移植物的存活時(shí)間，但與雷帕霉素聯(lián)合沒有增強(qiáng)效應(yīng)。
　　 4、與對(duì)照組比較，放線菌酮對(duì)CD4+T細(xì)胞擴(kuò)增無明顯影響（分別為8.0％和8.7％），而雷帕霉素顯著降低CD4+T細(xì)胞比例(2.8％)，雷帕霉素+放線菌酮聯(lián)合亦可顯著降低CD4+T細(xì)胞比例(3.2％);與對(duì)照組(4.3％)比較，放線菌酮可降低CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞比例(3.2％)，但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)

33、差異，P＞0.05;雷帕霉素明顯誘導(dǎo)CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞擴(kuò)增(5.6％);雷帕霉素+放線菌酮聯(lián)合顯著上調(diào)CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞比例(7.6％)，且聯(lián)合應(yīng)用組CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的比例明顯高于雷帕霉素單獨(dú)注射組，P＜0.05。結(jié)果提示在同種移植模型中放線菌酮增強(qiáng)了雷帕霉素優(yōu)勢擴(kuò)增CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的能力，而放線菌酮延長同種移植物存活除CD4+T細(xì)胞外，可能存在其它分子機(jī)制。<

34、br>　　 全文結(jié)論
　　 1.pim2在同種移植急性排斥高峰期高表達(dá)，Pim2蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)趨勢與同種移植急性排斥反應(yīng)的發(fā)生過程一致，且在脾臟及移植物部位高表達(dá)。提示Pim2激酶參與同種移植急性排斥反應(yīng)并介導(dǎo)移植物損害和組織損傷過程。
　　 2.Pim2通過磷酸化BAD Ser112位點(diǎn)對(duì)同種反應(yīng)性T細(xì)胞發(fā)揮抗凋亡作用，并優(yōu)勢介導(dǎo)效應(yīng)性CD4+CD25-T細(xì)胞的存活，從而發(fā)揮其增強(qiáng)同種移植排斥反應(yīng)的作用;抑制pim2

35、可明顯延長同種移植物的存活時(shí)間。
　　 3.Pim2對(duì)同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的增殖活化和發(fā)揮抑制功能是必要的;Pim2激酶對(duì)雷帕霉素選擇性擴(kuò)增同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞也是必要的。
　　 4.放線菌酮通過抑制pim2可有效延長同種移植物存活，放線菌酮體內(nèi)應(yīng)用顯著增強(qiáng)雷帕霉素優(yōu)勢擴(kuò)增CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞的能力。
　　 本文創(chuàng)新點(diǎn)
　　 1.

36、首次利用小鼠同種皮膚移植模型，證實(shí)pim2在同種移植模型中高表達(dá)并且通過細(xì)胞凋亡信號(hào)通路增強(qiáng)同種移植急性排斥反應(yīng)。研究結(jié)果為進(jìn)一步闡明同種移植急性排斥反應(yīng)的分子機(jī)制提供了理論依據(jù)。
　　 2.首次證實(shí)pim2蛋白對(duì)同種抗原誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的增殖、抑制效應(yīng)以及在雷帕霉素作用下的優(yōu)勢擴(kuò)增是必要的;放線菌酮可增強(qiáng)雷帕霉素體內(nèi)選擇性擴(kuò)增CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的能力。研究結(jié)果為CD4+C