經(jīng)心包腔轉(zhuǎn)染腺病毒血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165基因?qū)ωi急性心肌梗死的血管形成及心功能的影響.pdf

1、第一部分 復(fù)制缺陷的重組腺病毒經(jīng)心包腔轉(zhuǎn)染豬急性心肌梗死模型的實(shí)驗(yàn)研究 目的：建立豬急性心肌梗死模型，評(píng)價(jià)重組腺病毒經(jīng)心包腔的轉(zhuǎn)染效率及持續(xù)時(shí)間。 方法：應(yīng)用磷酸鈣沉淀方法制備攜帶大腸桿菌LacZ基因復(fù)制缺陷的重組腺病毒(Ad-LacZ)，隨機(jī)將12頭中國(guó)小型豬分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組6頭。兩組豬均采用球囊堵塞前降支第一對(duì)角支遠(yuǎn)端以建立心肌梗死模型，心肌梗死模型建立后即刻，采用經(jīng)皮劍突下穿刺方法，將中心靜脈導(dǎo)管插

2、入心包腔內(nèi)轉(zhuǎn)染Ad-LacZ。實(shí)驗(yàn)組：以含膠原酶1200u及透明質(zhì)酸酶3000u的生理鹽水2ml預(yù)處理心包后，在心包腔內(nèi)注射含Ad-LacZ基因2.0×109p.f.u的生理鹽水液1ml;對(duì)照組：同樣方法預(yù)處理心包后，在心包腔內(nèi)注射生理鹽水1ml。分別于注射后3天、7天及28天處死動(dòng)物，對(duì)缺血心肌進(jìn)行染色及病理觀察。 結(jié)果：冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)前降支遠(yuǎn)端完全閉塞，病理顯示心肌有缺血和梗死；實(shí)驗(yàn)組注射Ad-LacZ基因后第3天、第7天

3、及28天后X-gal染色有陽(yáng)性細(xì)胞，以第7天最明顯，對(duì)照組無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞。 結(jié)論：應(yīng)用球囊堵塞法可成功建立豬急性心肌梗死模型，膠原酶及透明質(zhì)酸酶預(yù)處理心包后，腺病毒載體可轉(zhuǎn)染缺血心肌，并持續(xù)表達(dá)4周。 第二部分 經(jīng)心包腔轉(zhuǎn)染腺病毒血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165基因?qū)ωi冠脈血管形成影響的研究 目的：探討以腺病毒為載體的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165(Ad-VEGF165)基因經(jīng)心包腔轉(zhuǎn)染的表達(dá)規(guī)律，對(duì)缺血心肌血管生成的作用。

4、 方法：隨機(jī)將20頭中國(guó)小型豬分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10頭，每組又分3d(n=2)、7d(n=2)及28d(n=2)三個(gè)亞組。采用球囊堵塞前降支第一對(duì)角支遠(yuǎn)端建立心肌梗死模型，成模后即刻，實(shí)驗(yàn)組：采用經(jīng)皮劍突下穿刺中心靜脈導(dǎo)管心包腔內(nèi)轉(zhuǎn)染，以含膠原酶1200u及透明質(zhì)酸酶3000u的生理鹽水2ml預(yù)處理心包后，在心包腔內(nèi)注射含Ad-VEGF165基因2.0×109pfu的生理鹽水液1ml；對(duì)照組：同樣方法預(yù)處理心包后，在心包腔內(nèi)

5、注射生理鹽水1ml。注射后3天、7天及28天分別用免疫組化、超聲心動(dòng)圖對(duì)缺血心肌血管新生情況進(jìn)行檢測(cè)，并以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血漿、心包及心肌組織中Ad-VEGF165的表達(dá)。 結(jié)果：Ad-VEGF165基因經(jīng)心包腔轉(zhuǎn)染缺血心肌組織后，在心包及組織中成高表達(dá)，于7達(dá)到高峰，28天降至基線水平，血漿中無(wú)目的基因的表達(dá)；28天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組缺血心肌微血管密度(MVD)、心功能均明顯高于對(duì)照組[MVD，517.0±75.7/

6、mm2vs226.5±54.1/mm2，P=0.009；LVEF72.11±5.2％vs55.14±4.37％，P=0.005]。 結(jié)論：用膠原酶及透明質(zhì)酸酶預(yù)處理心包腔后，經(jīng)其轉(zhuǎn)染Ad-VEGF165可以誘導(dǎo)急性心肌梗死模型局部VEGF蛋白表達(dá)，促進(jìn)缺血心肌組織血管新生并能改善心功能。 第三部分 重組腺病毒血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165基因心包腔與冠狀動(dòng)脈轉(zhuǎn)染心肌的比較研究 目的：比較經(jīng)心包腔與冠狀動(dòng)脈轉(zhuǎn)染重組

7、腺病毒血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165基因(Ad-VEGF165)的有效性。 方法：20頭小型豬隨機(jī)分為心包轉(zhuǎn)染組(心包組)和冠脈轉(zhuǎn)染組(冠脈組)，兩組豬均采用球囊堵塞前降支第一對(duì)角支遠(yuǎn)端以構(gòu)建心肌梗死模型，心包組在心肌梗死模型建立后即刻，采用經(jīng)皮劍突下穿刺將中心靜脈導(dǎo)管插入心包腔內(nèi)，以膠原酶和透明質(zhì)酸酶預(yù)先處理心包，然后注射Ad-VEGF1651.0ml(2×109pfu)；冠脈組在心肌梗死模型建立后即刻，經(jīng)冠脈注射Ad-VEGF165

8、1.0ml(2×109pfu)，于注射前后3、7、28d分別測(cè)定組織內(nèi)VEGF水平、微血管密度(MVD)、心功能。 結(jié)果：心包組和冠脈組的心臟均表達(dá)有VEGF165基因，組織內(nèi)VEGF水平在7天時(shí)達(dá)高峰，28天時(shí)降至基線水平，前組高于后組(702±85pg/mlvs592±59pg/ml，P=0.026)。而兩組的微血管密度、心功能隨轉(zhuǎn)染時(shí)間延長(zhǎng)均明顯增加，但心包組優(yōu)于冠脈組(28d，MVD，517.0±75.7/mm2vs32

9、6.4±24.1/mm2，P=0.001；FS，32.9±2.2％vs30.6±2.1％，P=0.049；LVEF，72.11±5.2％vs65.87±2.16％，P=0.034)。 結(jié)論：導(dǎo)管介導(dǎo)的心包腔與冠脈轉(zhuǎn)染Ad-VEGF165基因治療心肌缺血是有效的、切實(shí)可行的，而前者可能是更有前途的新方法。 第四部分 心包穿刺簡(jiǎn)易裝置在基因轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用 目的：探討自制心包穿刺裝置轉(zhuǎn)染心臟的安全性、可行性。方法

10、：應(yīng)用磷酸鈣沉淀方法制備攜帶大腸桿菌LacZ基因復(fù)制缺陷的重組腺病毒(Ad-LacZ)，將12頭中國(guó)小型豬分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，采用球囊堵塞前降支第一對(duì)角支遠(yuǎn)端，心肌梗死模型建立后即刻，采用自制簡(jiǎn)易心包腔穿刺裝置經(jīng)皮劍突下穿刺，成功后置中心靜脈導(dǎo)管于心包腔內(nèi)并行轉(zhuǎn)染，28d后處死。實(shí)驗(yàn)組：膠原酶1200u及透明質(zhì)酸酶3000u預(yù)處理心包后，在心包腔內(nèi)注射Ad-LacZ基因2.0×109p.f.u；對(duì)照組：同樣方法預(yù)處理心包后，在心包腔內(nèi)注