人毛囊體外保存的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:
　　毛囊的體外保存對于臨床毛發(fā)移植具有重要意義，很多學(xué)者利用低溫以及玻璃化深低溫凍存等各種不同方法體外保存人完整毛囊，但效果均不理想，研發(fā)更有效的玻璃化冷凍保護(hù)劑是解決問題的關(guān)鍵。另外，毛囊再生與皮膚微環(huán)境具有復(fù)雜而密切的聯(lián)系，組織工程皮膚在一定程度上模擬了毛囊生長環(huán)境，本研究首次嘗試?yán)媒M織工程技術(shù)在體外常溫保存毛囊。
　　目的:
　　1.添加促進(jìn)毛囊再生的相關(guān)生長因子，優(yōu)化玻璃化冷凍保護(hù)劑。
　　

2、2.組織工程技術(shù)模擬毛囊的生長環(huán)境，探討常溫保存毛囊方法。
　　方法:
　　1.將臨床取得的健康頭皮分離為單個(gè)無損傷毛囊后，隨機(jī)分為體外培養(yǎng)組、慢速凍存組、玻璃化凍存組和細(xì)胞因子玻璃化凍存組。分別凍存24小時(shí)，72小時(shí)，1個(gè)月，6個(gè)月。通過長度測量、HE染色和免疫熒光染色檢測毛囊活性。
　　2.將分離的毛囊單位插入由成纖維細(xì)胞和Ⅰ型鼠尾膠原構(gòu)建的組織工程真皮后，分3次鋪入角質(zhì)形成細(xì)胞，浸沒培養(yǎng)1周、氣-液界面培養(yǎng)3周后

3、，通過鏡下觀察、HE染色和免疫組化檢測組織工程皮膚和毛囊的生長狀態(tài)。
　　結(jié)果:
　　1.經(jīng)過不同時(shí)間凍存后復(fù)溫，細(xì)胞因子HGF玻璃化凍存組毛囊5天內(nèi)生長率和生長長度高于其他凍存組，與體外培養(yǎng)組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;HE染色結(jié)果顯示該組毛囊細(xì)胞數(shù)量多于其他凍存組，且組織結(jié)構(gòu)更完整;免疫熒光染色顯示該組毛囊的干細(xì)胞存活數(shù)量明顯多于慢速凍存組和未加因子玻璃化凍存組。
　　2.經(jīng)過4周體外培養(yǎng)，植入毛囊的組織工程皮膚鏡下觀察可見毛囊

4、和皮脂腺等皮膚附屬器存在，毛囊形態(tài)維持21天未見毛乳頭損壞，該時(shí)間明顯長于體外懸浮培養(yǎng)。HE染色顯示植入毛囊的組織工程皮膚表面可見分層角化的表皮形成，免疫組化染色顯示其分化標(biāo)志物Keratin4和Keratin10表達(dá)陽性，表皮真皮連接處基底膜特異性標(biāo)志物L(fēng)aminin和Ⅳ型膠原呈連續(xù)表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　加入細(xì)胞因子HGF優(yōu)化玻璃化冷凍保護(hù)劑的玻璃化凍存技術(shù)可長期有效保存毛囊。復(fù)合毛囊單位的組織工程皮膚可以延長常溫體外毛