苦參堿對(duì)液氮保存人肝細(xì)胞的保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、終末期肝病患者需要生物人工肝來(lái)維持生命。而生物人工肝主要包括肝細(xì)胞、生物反應(yīng)器和體外血漿灌注三部分。其中，肝細(xì)胞是HBAL的主要生物成分，在HBAL中起核心作用，HBAL的支持作用主要來(lái)源于肝細(xì)胞的生物代謝功能。目前肝細(xì)胞來(lái)源有異種動(dòng)物的肝細(xì)胞、肝干細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因肝細(xì)胞、永生化肝細(xì)胞株、人肝細(xì)胞。其中動(dòng)物來(lái)源細(xì)胞可能有病毒感染的危險(xiǎn)；肝干細(xì)胞還處于研究起步階段，目前用于BAL的條件尚未成熟；轉(zhuǎn)基因肝細(xì)胞制備技術(shù)要求高，尋找合適的基因的問(wèn)題

2、還未解決。而人肝細(xì)胞安全性好，細(xì)胞生物學(xué)功能相同，特別是能夠提供同源的生物活性物質(zhì)，如白蛋白、肝細(xì)胞再生因子、凝血因子等，這些是其他細(xì)胞材料不具備的，故是目前生物人工肝的理想細(xì)胞材料。人肝細(xì)胞系有易獲得、形態(tài)一致、功能穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，且分泌的白蛋白等物質(zhì)與人體內(nèi)的物質(zhì)結(jié)構(gòu)一致，也是生物人工肝生物材料的潛在來(lái)源。 制備一個(gè)具有相似功能的生物人工肝需要約200g肝細(xì)胞。臨床使用的生物反應(yīng)器內(nèi)，細(xì)胞數(shù)量至少應(yīng)該達(dá)到15％的人肝細(xì)胞數(shù)量，即

3、約109個(gè)數(shù)量級(jí)才有臨床意義。解決大量肝細(xì)胞需求問(wèn)題傳統(tǒng)上采取傳代培養(yǎng)及用特殊材料為載體進(jìn)行高密度培養(yǎng)方法，但其工作量大、易污染、費(fèi)用高、對(duì)環(huán)境要求高，而且肝細(xì)胞經(jīng)多次傳代后，其活性、功能降低。肝細(xì)胞凍存可以克服以上肝細(xì)胞培養(yǎng)中的各種缺點(diǎn)，是解決大量肝細(xì)胞來(lái)源的重要方法。對(duì)凍存而言，國(guó)內(nèi)外多采用分階段降溫，快速?gòu)?fù)溫的方法；但對(duì)凍存保護(hù)劑(CPA)的濃度、凍存液的組成及保存時(shí)間等報(bào)道不一。凍存保護(hù)劑是肝細(xì)胞凍存的核心。臨床上用以對(duì)肝臟疾病

4、進(jìn)行護(hù)肝治療，且體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)苦參堿對(duì)肝細(xì)胞有抗損傷和改善肝細(xì)胞分泌蛋白作用。苦參堿對(duì)肝細(xì)胞凍存過(guò)程有無(wú)保護(hù)作用，與DMSO等凍存保護(hù)劑有無(wú)協(xié)同作用，以及與其他性質(zhì)的保護(hù)劑聯(lián)合使用時(shí)有何聯(lián)系呢?針對(duì)以上問(wèn)題目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)研究報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)苦參堿影響人胎肝細(xì)胞和L-02人肝細(xì)胞超低溫保存的多種因素，包括低溫保存時(shí)保護(hù)劑的搭配的選擇及其濃度的合理使用方案等進(jìn)行了探討。 第一部分：苦參堿對(duì)人胎肝細(xì)胞液氮保存的影響 目的：了

5、解苦參堿對(duì)人胎肝細(xì)胞液氮凍存復(fù)蘇后功能的影響，探索一種改善人肝細(xì)胞凍存的新方法。 結(jié)論： (1)苦參堿對(duì)人胎肝細(xì)胞液氮凍存有保護(hù)作用，6mg/L苦參堿是最好的濃度； (2)苦參堿與二甲基亞砜聯(lián)合使用降低了凍存保護(hù)劑二甲基亞砜(DMSO)的濃度，表明兩者有協(xié)同作用。 第二部分：苦參堿對(duì)L-02人肝細(xì)胞系液氮保存的影響 目的：了解不同濃度劑量苦參堿與凍存保護(hù)劑聯(lián)用對(duì)L-02人肝細(xì)胞系液氮凍存復(fù)蘇后功能