依硫磷酸促進(jìn)Dami細(xì)胞分化的初步研究.pdf

1、背景:依硫磷酸(通用名:氨磷汀)是一種泛細(xì)胞保護(hù)劑,臨床主要用于腫瘤放療或細(xì)胞毒化療的臟器保護(hù)。基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)依硫磷酸還具有其他作用,包括類造血生長因子、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞周期進(jìn)程等,然而,這些作用并不能用經(jīng)典的堿性磷酸酶途徑解釋,說明依硫磷酸還有其他作用途徑。我們前期臨床研究發(fā)現(xiàn),以依硫磷酸為主的聯(lián)合方案治療慢性ITP及MDS患者,獲得血象改善,且ITP患者骨髓巨核細(xì)胞的成熟障礙減輕,但機(jī)制并不清楚。我們應(yīng)用生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)依

2、硫磷酸可能具有調(diào)控細(xì)胞分化的作用,本研究擬以人巨核細(xì)胞白血病Dami細(xì)胞系為對象,觀察依硫磷酸促進(jìn)Dami細(xì)胞向成熟巨核細(xì)胞分化的作用,為前期臨床研究提供理論依據(jù)。
　　方法:生物信息學(xué)預(yù)測依硫磷酸是否具有調(diào)控細(xì)胞分化的作用;細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測依硫磷酸對Dami細(xì)胞增殖的影響,篩選依硫磷酸促進(jìn)Dami細(xì)胞分化的合適濃度;流式細(xì)胞儀檢測CD33、CD34、CD41a的表達(dá),鑒定Dami細(xì)胞所處的分化階段;Giemsa染色顯示細(xì)胞核,倒置

3、顯微鏡、透射電鏡觀察依硫磷酸(0.1mmol/L處理0、4、8、12天)對Dami細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響;流式細(xì)胞儀檢測DNA倍體化及細(xì)胞膜CD41a、CD33表達(dá)的變化。Q-PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)錄因子GATA-1、Fli-1、NF-E2在mRNA水平及蛋白水平表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:1)生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn)依硫磷酸可能調(diào)控細(xì)胞的分化,并得到依硫磷酸促進(jìn)細(xì)胞分化相關(guān)的8個(gè)基因;2)本研究發(fā)現(xiàn)低濃度(0.1mmol/L)依

4、硫磷酸能促進(jìn) Dami細(xì)胞向成熟巨核細(xì)胞分化,而高濃度(>1mmol/L)則明顯抑制 Dami細(xì)胞增殖;3)依硫磷酸(0.1mmol/L)能誘導(dǎo)Dami細(xì)胞由原始巨核細(xì)胞向成熟巨核細(xì)胞分化。表現(xiàn)為依硫磷酸處理第12天,Dami細(xì)胞出現(xiàn)血小板分界膜系統(tǒng),直徑>20μM的細(xì)胞比例較對照增加24.63％,細(xì)胞表面 CD41a Mean值增加206.43,CD33表達(dá)陽性率下降13.98%;和對照比,DNA倍體化2N下降20.93%,4N增加1

5、5.93%,8N增加8.62%,16N增加3.41%;4)Q-PCR和western blot結(jié)果顯示,巨核細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GATA-1、Fli-1、NF-E2在mRNA水平及蛋白水平表達(dá)沒有升高。
　　結(jié)論:1)不同濃度依硫磷酸對Dami細(xì)胞作用不同,低濃度(0.1mmol/L)誘導(dǎo)分化,高濃度(>1mmol/L)抑制其增殖;2) Dami細(xì)胞分化表現(xiàn)在細(xì)胞體積增大,產(chǎn)生血小板分界膜系統(tǒng),細(xì)胞CD41a表達(dá)增加,CD33表達(dá)