蔗糖酯型陽(yáng)離子類脂的設(shè)計(jì)合成及其基因轉(zhuǎn)運(yùn)研究.pdf

1、基因治療已用于治療癌癥等疾病，其中基因載體的開發(fā)是關(guān)鍵。陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為基因載體，具有制備簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、生物降解性好和易于商品化等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)越來越受到科研人員的關(guān)注。但現(xiàn)有陽(yáng)離子脂質(zhì)體還存在轉(zhuǎn)染效率較低和一定的細(xì)胞毒性。
　　針對(duì)上述問題，本論文設(shè)計(jì)合成了三個(gè)新型的以季銨鹽為頭部，蔗糖為骨架，酯鍵為連接鍵，不同長(zhǎng)度的烷基鏈（C12，C14和C16）為疏水尾部的蔗糖酯型陽(yáng)離子類脂，將其構(gòu)建成陽(yáng)離子脂質(zhì)體，作為基因載體用于基因轉(zhuǎn)

2、運(yùn)。所合成的三個(gè)季銨鹽化合物經(jīng)柱層析和重結(jié)晶分離提純后，得到HPLC純度97％以上的產(chǎn)物。采用ESI-MS、Q-TOF-MS、IR、1HNMR和13C NMR表征，證明結(jié)構(gòu)正確。
　　將所合成的蔗糖酯型陽(yáng)離子類脂用薄層分散與超聲分散相結(jié)合的方法制備成陽(yáng)離子脂質(zhì)體，并采用透射電鏡、動(dòng)態(tài)光散射以及Zeta電位儀等手段對(duì)其進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)所制備的脂質(zhì)體基本呈橢球形，尺寸在100-300 nm之間，脂質(zhì)體的表面都帶正電荷，電位在25-90

3、mV之間。
　　利用瓊脂糖凝膠電泳以及Zeta電位儀等手段研究了脂質(zhì)體與DNA的結(jié)合能力。結(jié)果表明，陽(yáng)離子脂質(zhì)體對(duì)DNA有延滯作用，所制備的陽(yáng)離子脂質(zhì)體均可與DNA形成復(fù)合物，且隨著脂質(zhì)體與DNA比例(N/P比)的增大，脂質(zhì)體與DNA的結(jié)合能力增加;在陽(yáng)離子脂質(zhì)體中分別加入助類脂二油?；字Ｒ掖及?DOPE)或膽固醇(Chol)后，結(jié)合DNA的能力增強(qiáng)，均能在N/P比為10/1時(shí)完全延滯。隨著疏水鏈長(zhǎng)度的增加，與DNA結(jié)合能力增

4、強(qiáng)。
　　利用合成的蔗糖酯型陽(yáng)離子類脂結(jié)合助類脂和pDNA（或siRNA）構(gòu)建了蔗糖酯型陽(yáng)離子類脂/助類脂/pDNA（或siRNA）三元復(fù)合載體，以此作為基因運(yùn)載工具，對(duì)癌細(xì)胞進(jìn)行了體外轉(zhuǎn)染或基因沉默研究。體外轉(zhuǎn)染研究結(jié)果表明，當(dāng)脂質(zhì)體與DNA比例在4/1附近時(shí)蔗糖酯型陽(yáng)離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效果最佳;類脂與助類脂DOPE和Chol的比例分別為1/1和3/1時(shí)，轉(zhuǎn)染效率最高，膽固醇可提高三元復(fù)合載體的核酸遞送效率，約為加入DOPE的1.

5、1倍;此外，十二和十四碳尾部的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率明顯優(yōu)于十六碳尾部的脂質(zhì)體;陽(yáng)離子類脂（TSI12+C3/1和TSI14+C3/1）進(jìn)行優(yōu)化后轉(zhuǎn)染效率明顯優(yōu)于商品試劑2，3-二油氧基丙基三甲基氯化銨(DOTAP)與商品試劑Lipofectamine2000相當(dāng)?；虺聊芯拷Y(jié)果顯示，經(jīng)過優(yōu)化后三元復(fù)合載體可在A549細(xì)胞中高效沉默目的基因，由膽固醇構(gòu)建的三元復(fù)合載體(TSI14+C3/1)獲得基因沉默的效果最佳，抑制率約為97％，優(yōu)于商品轉(zhuǎn)