Liguzinediol通過(guò)作用于肌漿網(wǎng)鈣釋放發(fā)揮正性肌力作用及其心臟安全性評(píng)價(jià).pdf

1、目的：
　　 探索Liguzinediol(LZDO)對(duì)正常大鼠離體心臟正性肌力作用的機(jī)理，并評(píng)價(jià)其心臟安全性。
　　 方法：
　　 1．大鼠Langendorff離體心臟灌流：
　　 采用常規(guī)大鼠Langendorff離體心臟灌流技術(shù)，記錄左心室收縮功能。分析LZDO以及LZDO在α1、β、D1、H1受體阻滯劑，磷酸二酯酶、Na+-K+-ATP酶、Na+-Ca2+交換抑制劑，L-型鈣通道阻滯劑，蘭尼堿受

2、體、肌漿網(wǎng)鈣泵抑制劑存在的條件下，對(duì)左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末期壓(LVEDP)、左心室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax)、心率(HR)的作用。
　　 2．GPCR受體活性測(cè)定技術(shù)：
　　 我們選取了與心肌收縮力有關(guān)的31個(gè)GPCR受體，分析LZDO對(duì)它們的作用。
　　 3．大鼠心臟乳頭肌動(dòng)作電位記錄：
　　 采用常規(guī)大鼠離體乳頭肌動(dòng)作電位記錄

3、技術(shù)，記錄乳頭肌動(dòng)作電位的各參數(shù)。分析LZDO對(duì)動(dòng)作電位復(fù)極50％水平的時(shí)程(APD50)和90％水平的時(shí)程(APD90)的作用。
　　 4．全細(xì)胞電流鉗記錄技術(shù)：
　　 采用膜片鉗全細(xì)胞電流鉗技術(shù)，記錄大鼠左心室單個(gè)肌細(xì)胞的動(dòng)作電位的各參數(shù)。分析LZDO對(duì)動(dòng)作電位復(fù)極50％水平的時(shí)程(APD50)和90％水平的時(shí)程(APD90)的作用。
　　 5．全細(xì)胞電壓鉗記錄技術(shù)：
　　 應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞電壓鉗技術(shù)

4、，分析LZDO對(duì)L-型鈣電流的作用，探討LZDO正性肌力作用的機(jī)制；分析LZDO對(duì)hNav1.5電流、hERG電流的作用，對(duì)其進(jìn)行心臟安全性評(píng)價(jià)。
　　 6．細(xì)胞內(nèi)鈣成像技術(shù)：
　　 采用細(xì)胞內(nèi)鈣成像的方法研究LZDO對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)鈣釋放的作用。
　　 7．在體和離體心電圖技術(shù)：
　　 采用常規(guī)豚鼠在體和離體心電圖技術(shù)，研究LZDO對(duì)豚鼠心電圖的P-R間期和QTc間期的影響。
　　 結(jié)果：
　

5、　 1．LZDO劑量依賴性地增加大鼠離體左心室收縮力，其正性肌力作用能被L-型鈣通道阻滯劑、蘭尼堿受體抑制劑、肌漿網(wǎng)鈣泵抑制劑所完全阻斷：
　　 LZDO能顯著地增加左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末期壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)、左室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax)，但并不顯著性地改變心率。在α1受體阻滯劑哌唑嗪(Prazosin1μM)、β受體阻滯劑普萘洛爾(Propranolol

6、1μM)、多巴胺D1受體阻滯劑(SCH233901μM)、H1受體阻滯劑非索那定(Fexofenadine1μM)、磷酸二酯酶抑制劑IBMX(5μM)、Na+-K+-ATP酶抑制劑哇巴因(Ouabain1μM)、Na+-Ca2+交換抑制劑(KB-R79431μM)存在的條件下，LZDO100μM仍能顯著地增加上述功能指標(biāo)(P＜0.05)。L-型鈣通道阻滯劑尼莫地平(Nimodipine1μM)、L-型鈣通道阻滯劑維拉帕米(Verapam

7、il1μM)、蘭尼堿受體抑制劑釕紅(Rutheniumred5μM)、肌漿網(wǎng)鈣泵抑制劑毒胡蘿卜素(Thapsigargin2μM)能完全阻斷LZDO100μM的正性肌力作用(P＞0.05)，顯示LZDO的正性肌力作用是通過(guò)L-型鈣通道、蘭尼堿受體和肌漿網(wǎng)鈣泵所介導(dǎo)的。
　　 2．LZDO對(duì)GPCR受體無(wú)顯著性的激活作用：
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LZDO100μM對(duì)31個(gè)GPCR受體無(wú)顯著性的激活作用。
　　 3.L

8、ZDO對(duì)正常大鼠乳頭肌動(dòng)作電位無(wú)顯著性作用：
　　 LZD0100μM對(duì)大鼠乳頭肌動(dòng)作電位的復(fù)極50％水平的時(shí)程(APD50)和90％水平的時(shí)程(APD90)無(wú)顯著性作用(P＞0.05)。
　　 4．LZDO對(duì)正常大鼠心肌細(xì)胞動(dòng)作電位無(wú)顯著性作用：
　　 LZDO100μM對(duì)大鼠左心室單個(gè)肌細(xì)胞動(dòng)作電位的復(fù)極50％水平的時(shí)程(APD50)和90％水平的時(shí)程(APD90)無(wú)顯著性作用(P＞0.05)。
　　

9、 5．LZDO并不能增加正常大鼠左心室肌細(xì)胞的L-型鈣電流，LZDO對(duì)hNav1.5電流與hERG電流均無(wú)顯著性的抑制作用：
　　 LZDO100μM對(duì)大鼠左心室單個(gè)肌細(xì)胞的L-型鈣電流無(wú)顯著性作用(P＞0.05），顯示LZDO的作用靶點(diǎn)不是L-型鈣通道；LZDO(1，10，100,300μM)對(duì)hNav1.5電流無(wú)顯著性的抑制作用；LZDO(1，10，100,300μM)對(duì)hERG電流無(wú)顯著性的抑制作用。
　　 6．L

10、ZDO顯著性地增加正常大鼠左心室肌細(xì)胞內(nèi)的鈣釋放量：
　　 LZDO100μM可以顯著性地增加大鼠左心室肌細(xì)胞內(nèi)的鈣釋放量(P＜0.05);LZDO100μM可以恢復(fù)由咖啡因所引起的肌漿網(wǎng)鈣衰竭現(xiàn)象，這說(shuō)明LZDO的作用靶點(diǎn)不是蘭尼堿受體。
　　 7．LZDO對(duì)豚鼠在體和離體心臟心電圖的P-R間期及QTc問期均無(wú)顯著性的影響：
　　 豚鼠在體給予LZDO1.7g·kg-1或豚鼠離體心臟灌流LZDOP300μM后，