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文檔簡介
1、目的:大蒜(Allium Sativum L.)富含大量的生物活性物質(zhì)和營養(yǎng)成分,目前,大量研究證明,大蒜具有殺菌、降血脂、抗血栓、預(yù)防中風(fēng)和高血壓、保護肝臟和提高機體免疫力、抗癌等功能,是近代醫(yī)藥研究的熱點之一。目前公認大蒜的功效成分是蒜氨酸(Alliin,S-allyl-L-cysteine,2-烯丙基半胱氨酸亞砜)及經(jīng)蒜酶(Alliinase,EC 4.4.1.4)催化裂解產(chǎn)生的大蒜辣素(Allicin,allyl-2-prope
2、nethiosulfinate,2-烯丙基硫代亞磺酸酯)和阿霍烯(ajoene)等含硫化合物。由于目前市場上的大蒜制劑含量低,療效差,制備工藝簡單,大多數(shù)大蒜制劑都是以保健品的方式銷售,因此按照本課題組的設(shè)計思路,利用現(xiàn)代生物制藥技術(shù)從大蒜中分別提取相對穩(wěn)定的蒜氨酸和蒜酶,以提取出的高純度的蒜氨酸和蒜酶作為原料,制成真正的“高效大蒜新制劑”,充分發(fā)揮療效。蒜氨酸、蒜酶作為大蒜中最主要的原始活性成分及風(fēng)味物質(zhì)來源,測定其含量能夠給今后的中
3、試生產(chǎn)提供可靠的依據(jù)。蒜氨酸、蒜酶原料藥中試生產(chǎn)過程中,各個檢測點的樣品分析也能提供中試生產(chǎn)的質(zhì)量控制。最后對中試生產(chǎn)得到的原料藥蒜氨酸制定了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(草案)及起草說明。 方法:利用HPLC對鮮蒜、蒜氨酸、蒜酶進行了定量分析方法學(xué)的研究,利用研究的結(jié)果對蒜氨酸、蒜酶中試生產(chǎn)的檢測點樣品進行分析,最后制定蒜氨酸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(草案)及其起草說明。 結(jié)果:本文分別建立了測定鮮蒜、蒜氨酸、蒜酶的分析方法。在測定鮮蒜的蒜氨酸含量中采用
4、了外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法兩種方法,并進行了的對比;考察了適合于測定50%蒜氨酸含量的分析方法;并將以上兩種測定于美國藥典中收載的衍生化法進行了對比;建立了HPLC法測定蒜酶活力的方法: 1.鮮蒜、蒜氨酸、蒜酶的分析方法1.1鮮蒜的含量測定外標(biāo)法:Hypersil BDS C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流動相為0.04%三氟乙酸水溶液,檢測波長為UV 214 nm,流速:0.5 mL·min-1。 內(nèi)標(biāo)法:Water
5、s symmetry shield RP C18柱(4.6mm×250mm,5 μm),流動相為水,檢測波長為UV 214 nm,流速:0.5mL·min-1。 1.2蒜氨酸(50%)的含量測定Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流動相為甲醇:0.02%CF3COOH水溶液(5:95),檢測波長:UV 214 nm,流速:0.5 mL·min-1。 1.3與USP方法對比Thermo
6、 ODS柱(4.0 mm×100 mm,3μm);流動相:0.045 mol·mL-1磷酸緩沖液:乙腈:1,4-二氧六環(huán):四氫呋喃=69.9:25:2.9:2.2,流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:UV 337 nm。 同樣測定鮮蒜和蒜氨酸(≥50%)樣品,結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)差異。 1.4蒜酶活力測定Hypersil BDS C18柱(4.6mmx250 mm,5μm),流動相為甲醇-水(55:45),檢測波長:UV
7、214nm,流速:0.5 mL·min-1。。 2.蒜氨酸、蒜酶中試生產(chǎn)過程檢測點分析本文確定了,蒜氨酸中試生產(chǎn)檢測點的分析方法是:HPLC法,條件是HypersilBDS C18柱(4.6mmx250mm,5μm),流動相為0.04%三氟乙酸水溶液,檢測波長為UV 214 nln,流速:0.5 mL·min-1;蒜酶中試生產(chǎn)檢測點的分析方法是紫外分光光度法,用丙酮酸法測定蒜酶的活力,用Bradford法測定蒜酶蛋白質(zhì)含量,從而
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