應(yīng)用自體和同種異體半腱肌重建兔前叉韌帶后移植物組織學(xué)轉(zhuǎn)歸對(duì)比研究.pdf

1、目的：前交叉韌帶（anterior cruciate ligament，ACL）是膝關(guān)節(jié)的重要結(jié)構(gòu)，其主要功能是控制膝關(guān)節(jié)旋轉(zhuǎn)和防止脛骨過度前移或股骨后移，ACL損傷后可產(chǎn)生明顯的膝關(guān)節(jié)前向不穩(wěn)并導(dǎo)致一系列繼發(fā)性損害，可繼發(fā)關(guān)節(jié)軟骨、半月板等結(jié)構(gòu)損壞和骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生，影響功能，嚴(yán)重者可導(dǎo)致膝關(guān)節(jié)病廢。
　　 隨著我國現(xiàn)代交通工業(yè)的迅速發(fā)展以及體育運(yùn)動(dòng)的深入發(fā)展，ACL損傷發(fā)病率的不斷提高，關(guān)于ACL的研究日趨增多，隨著關(guān)節(jié)鏡技

2、術(shù)的快速發(fā)展，目前ACL斷裂后的治療方法主要是關(guān)節(jié)鏡下韌帶重建術(shù)。目前應(yīng)用應(yīng)用自體半腱肌腱和股薄肌腱重建ACL或者自體骨-髕腱（中1/3）-骨（BPTB）重建ACL的方法是國內(nèi)外重建ACL的主要方法，近幾年國內(nèi)選用異體移植物進(jìn)行ACL一期修復(fù)和返修手術(shù)呈現(xiàn)上升趨勢，ACL重建移植物的選擇以及重建后移植物的組織學(xué)轉(zhuǎn)歸一直是ACL修復(fù)與重建領(lǐng)域的一個(gè)重要的研究課題，對(duì)ACL重建術(shù)后的康復(fù)治療具有重要的指導(dǎo)意義。本實(shí)驗(yàn)通過觀察兔自體和同種異體

3、半腱肌重建ACL的組織學(xué)和組織化學(xué)變化，探討自體和同種異體移植物重建ACL塑型改建過程以及血管生成的區(qū)別。
　　 方法：
　　 1、動(dòng)物分組與取材
　　 24只骨骼成熟雄性新西蘭兔隨機(jī)分為兩組，分別接受自體半腱肌和同種異體半腱肌重建ACL，異體半腱肌的取材與保存是無菌操作下取同種異體的成年雄性新西蘭兔半腱肌，手術(shù)取髕腱內(nèi)側(cè)縱行切口，于脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)后，大腿內(nèi)側(cè)，分離出半腱肌腱，修整干凈后每根分別以三層無菌密封袋封裝，

4、將標(biāo)本置入-80°冰箱內(nèi)保存14天后備用。
　　 2、手術(shù)方法
　　 每只新西蘭兔予20％氨基甲酸乙酯（烏拉坦）5ml/Kg耳緣靜脈注射及氯胺酮0.1g肌肉注射行全身麻醉，術(shù)前肌肉注射青霉素20萬單位預(yù)防感染。雙膝術(shù)區(qū)備皮，消毒，鋪無菌手術(shù)巾。屈膝90度，取髕腱內(nèi)側(cè)縱行切口，予脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)后，大腿內(nèi)側(cè)，分離出半腱肌腱，保留遠(yuǎn)端止點(diǎn)，向上自腱和肌腹交界處以上盡量靠近近端切斷，以保留盡量長的半腱肌腱，剔除肌性部分，腱近端用3-

5、0的滌綸編織線縫編做為牽引線備用。沿髕腱內(nèi)側(cè)切開至關(guān)節(jié)腔，外推髕骨致脫位，切斷翼狀皺襞，于上下止點(diǎn)處完整切除ACL，查前抽屜及Lachman試驗(yàn)陽性，然后用1.5mm鉆頭自脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)上骨面向原ACL下止點(diǎn)鉆骨道，通過該骨道再向上、向外、向后至股骨外髁髁間側(cè)面，靠近ACL上止點(diǎn)處鉆骨道，鉆通至股骨外髁外側(cè)的骨面，用鋼絲引導(dǎo)牽引線，將肌腱自內(nèi)側(cè)副韌帶的淺層，穿經(jīng)脛骨和股骨骨道，于屈膝位拉緊，用克氏針分別于股骨脛骨干上鉆孔，以骨橋法將肌腱牢固

6、固定于股骨、脛骨外側(cè)的骨面上。查前抽屜及Lachman試驗(yàn)陰性后，慶大霉素鹽水沖洗關(guān)節(jié)腔和皮下，逐層間斷縫合切口。術(shù)后肌注青霉素1次（80萬單位/次/天）。術(shù)后統(tǒng)一籠養(yǎng)，自由活動(dòng)。
　　 3、組織學(xué)觀察
　　 分別于術(shù)后3周、6周、12周、24周隨機(jī)取材，每次取3只，肉眼觀察關(guān)節(jié)腔內(nèi)重建韌帶的大體形態(tài)，HE、甲苯胺蘭及免疫組織化學(xué)染色，觀察關(guān)節(jié)腔內(nèi)重建韌帶的組織學(xué)變化過程及血管生成情況，并用Chalkley血管計(jì)數(shù)法對(duì)血

7、管生成數(shù)量進(jìn)行定量檢測。
　　 結(jié)果：解剖及組織學(xué)方面：兔交叉韌帶在大體解剖形態(tài)上與人類基本相同，重建后韌帶在關(guān)節(jié)內(nèi)經(jīng)歷了再血管化、細(xì)胞長入、膠原纖維再生和再塑型的過程。組織學(xué)染色顯示術(shù)后3周時(shí)，組織內(nèi)部呈壞死狀態(tài)，周邊成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞開始長入，以炎性細(xì)胞為主。甲苯胺藍(lán)染色無異染物質(zhì)出現(xiàn)。免疫組化血管陽性染色位于移植物韌帶束膜，自體移植物組和異體移植物組無明顯差別。術(shù)后6周自體移植物組進(jìn)入供體的血管（13.407±0.11）多于

8、同種異體移植物組（8.815±0.13），自體移植物組成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞數(shù)目多于異體移植物組，兩組甲苯胺藍(lán)染色無異染物質(zhì)出現(xiàn)。術(shù)后12周大量成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞進(jìn)入移植物，自體移植物組成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞數(shù)目多于異體移植物組，自體移植物組甲苯胺藍(lán)異染物質(zhì)開始出現(xiàn)，兩組的免疫組化血管陽性染色均增加，但異體移植物組（12.556±0.11）仍然少于自體移植物組（16.815±0.64）。術(shù)后24周，自體移植物組（分別為7.444±0.11）血管計(jì)數(shù)均

9、低于異體移植物組（分別為11.222±0.11），但仍比正常ACL（1.000±0.11）數(shù)目多，成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞呈較統(tǒng)一的梭形，周圍區(qū)細(xì)胞核主要為紡錘體狀、桿狀，中心區(qū)圓形、橢圓形細(xì)胞核稍多，可見串珠樣排列，核周圍有陷窩，類似于軟骨細(xì)胞；膠原纖維縱向排列規(guī)律有序，并呈波狀，其組織學(xué)形態(tài)已經(jīng)類似正常ACL。異體移植物組細(xì)胞數(shù)目比自體移植物組多，膠原纖維束沿應(yīng)力方向排列、較規(guī)律。兩組甲苯胺蘭染色均可以見到異染。異體移植物組血管陽性染色較1

10、2周時(shí)減少，但多于自體移植物組，自體移植物組陽性染色較前減少。組織學(xué)和組織化學(xué)變化過程說明異體移植物組塑性改建過程滯后于自體移植物組。
　　 結(jié)論：本課題采用自體和異體雙股半腱肌腱重建兔ACL，通過兩種不同移植物重建ACL的組織學(xué)和免疫組織化學(xué)表現(xiàn)，探討了這兩種不同移植物重建ACL對(duì)移植物新生血管的生成情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常ACL在組織形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)和膠原分布上均表現(xiàn)出其特異性，與一般的肌腱和韌帶組織不同，具有類軟骨特性。關(guān)