基于核受體靶點的小分子設(shè)計及化學(xué)生物學(xué)研究.pdf

1、視黃酸X受體α(retinoid X repcetorsα，RXRα)是核受體超家族中重要的一員，RXRα受體能選擇性的與配體相結(jié)合或與其他核受體形成同源二聚體或異源二聚體，調(diào)控細胞的生理效應(yīng)，并且參與了生物體生長、發(fā)育、免疫和死亡等幾乎所有的生理過程的調(diào)節(jié)，因此，它的生物學(xué)功能與疾病密切相關(guān)，例如腫瘤以及代謝綜合癥等。所以 RXRα受體一直是研究的熱點。目前報道的能與RXRα受體結(jié)合的天然小分子有9-cis-RA，而人工合成的有活性配

2、體也不多，因此，我們的研究目的是根據(jù) RXRα受體的結(jié)構(gòu)特點設(shè)計一系列化合物，篩選出能與RXRα受體結(jié)合的小分子化合物。
　　本課題通過優(yōu)化RXRα-LBD蛋白提取條件，得到較高產(chǎn)量的RXRα-LBD蛋白。通過Biacore技術(shù)（Biomolecular interaction analysis）偶聯(lián)RXRα-LBD蛋白對實驗室現(xiàn)有化合物進行高通量篩選，篩選得到6個有結(jié)合活性的小分子化合物，并測得它們的解離平衡常數(shù)KD值。進一步采

3、用等溫滴定量熱法（Isothermal titration calorimetry，ITC）測定這6個小分子化合物與RXRα-LBD蛋白的結(jié)合能力，通過實驗方法的改進和優(yōu)化，最后得到 WH-30和WH-15兩個小分子化合物的解離平衡常數(shù)KD值以及熱力學(xué)參數(shù)。它們的KD值與Biacore實驗結(jié)果相近，熱力學(xué)參數(shù)表明WH-30和WH-15與RXRα-LBD蛋白的結(jié)合是自發(fā)進行的放熱反應(yīng)。用 AutoDock4.2.5軟件對篩選出的兩個小分子

4、化合物 WH-30和WH-15與RXRα-LBD同源二聚體（PDB ID：4N5G）進行分子對接，得到自由結(jié)合能和分子對接圖，自由結(jié)合能表示化合物與RXRα-LBD同源二聚體有結(jié)合活性，分子對接圖可以直觀看到WH-30和WH-15結(jié)合到RXRα-LBD同源二聚體的配體結(jié)合口袋，并與氨基酸形成氫鍵。因此，本課題通過 Biacore、ITC技術(shù)以及分子對接實驗得到兩個靶向結(jié)合RXRα-LBD蛋白的小分子化合物WH-30和WH-15，為治療與