高壓氧對缺氧缺血性腦損傷大鼠SVZ神經(jīng)干細(xì)胞及腦功能的影響.pdf

1、目的：探討高壓氧(hyperbaric oxygen，HBO)對宮內(nèi)缺氧缺血腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞及腦功能的影響，為HIBD康復(fù)提供實驗及理論依據(jù)。 方法：參照Bjelke等[1]的方法結(jié)扎孕21d的SD大鼠一側(cè)子宮角血管，建立宮內(nèi)HIBD模型，正常對照組為另一側(cè)未結(jié)扎子宮內(nèi)的大鼠。將HIBD及正常對照組大鼠，各分別分為3組：HIBD組、HIBD+ HBO

2、組、常壓氧(normobaric oxygen，NBO)干預(yù)HIBD(HIBD+NBO)組；對照組、單純HBO組和單純NBO組，每組30只。HIBD大鼠根據(jù)體重、HIBD損傷程度進行隨機區(qū)組分組；正常大鼠根據(jù)隨機數(shù)字表進行隨機分組。HBO干預(yù)采取2ATA壓力純氧，NBO干預(yù)采取常壓純氧，于大鼠出生后(postnatal，P)24h進行干預(yù)，每日1次，每次1h，連續(xù)14d。非干預(yù)組常規(guī)飼養(yǎng)，不予干預(yù)。于P12h、P15d和P28d上述各組

3、大鼠隨機取10只，分別處死取腦，制作腦組織勻漿，采取黃嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸比色法分別檢測腦組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(malonyldialdehyde，MDA)的水平：并解離腦室管膜下區(qū)(subventricularzone，SVZ)，行短時培養(yǎng)，通過免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法，以神經(jīng)干細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白nestin抗體標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells，NSCs)。

4、P28d大鼠在處死前，分別給予閃光視覺誘發(fā)電位(flash-visual evoked potentials，F(xiàn)-VEP)及水迷宮學(xué)習(xí)記憶功能檢測。 結(jié)果 1.P12h HIBD組SOD值和MDA值分別為(71.54±4.00 U/mgprot；27.53±4.11nmol/mgprot)，SOD值較對照組(91.52±6.90 U/mgprot)低，而MDA值較對照組(16.25±2.42 nmol/mgprot)高，

5、均具有顯著性差異(P<0.01)。HIBD+HBO組P15d的SOD值和MDA值與對照組無明顯差異(P>0.05)，但SOD值高于HIBD+ NBO組和HIBD組(P<0.01)，而MDA值低于HIBD+ NBO組和HIBD組(P<0.01)。P15d時，HIBD+NBO組與HIBD組、單純NBO組與對照組以及單純HBO組與對照組的SOD值和MDA值比較均無顯著差異(P>0.05)。P28d時，五組大鼠的SOD值和MDA值與對照組SOD

6、值和MDA值無顯著差別(P>0.05)。 2.HIBD組P12h SVZ NSCs含量(M=3.36％)較對照組(M=6.03％)明顯減少(P<0.01)。HBO干預(yù)后，P15d和P28d HIBD大鼠SVZ NSCs含量與對照組無明顯差異(P>0.05)，但高于HIBD+NBO組和HIBD組(P<0.01)。單純HBO組P15d和P28d SVZ NSCs含量亦較對照組升高(P<0.01)。HIBD+ NBO組與HIBD組、單

7、純NBO組與對照組NSCs含量比較均無顯著差異(P>0.05)。 3.P28d HIBD組新生大鼠F-VEP主波P1潛伏期(58.60±5.12 ms)較對照組(48.67±4.15 ms)延長(P<0.01)，而HIBD+HBO組則與對照組無差異(P>0.05)。HIBD+ NBO組與HIBD組、單純NBO組與對照組以及單純HBO組與對照組主波Pl潛伏期比較均無顯著差異(P>0.05)。 4.HIBD組大鼠學(xué)會正確上臺

8、所需訓(xùn)練次數(shù)(15.90±2，13次)較對照組(9.10±1.29次)為多(P<0.01)；HIBD+HBO組所需訓(xùn)練次數(shù)較HIBD組減少(P<0.01)，但仍多于對照組(P<0.01)。HIBD+NBO組與HIBD組、單純NBO組與對照組以及單純HBO組與對照組訓(xùn)練次數(shù)比較均無顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論：予HIBD后24h進行HBO干預(yù)，持續(xù)14d可明顯增強缺氧缺血后腦組織的抗氧化能力，促進SVZ NSCs的存活，縮短缺